环孢菌素A-纳米乳预处理抑制猪脂肪组织来源干细胞的凋亡

• 作 者: 尹巧香 裴志勇 王恒 赵玉生
• 机 构: 100142北京,空军总医院干部病房心内科,北京军区总医院干部病房一科,空军总医院神经内科,解放军总医院老年心血管病研究所
• 发表日期: 2013年41期
• 关键词: 干细胞 环孢菌素 细胞凋亡 纳米粒子

目的

通过与环孢菌素A（CsA）比较，评估环孢菌素A-纳米乳(CsA-NP) 预处理保护猪脂肪组织来源干细胞（ASC）抗凋亡作用及可能机制。

方法

采用过氧化氢（H₂O₂）体外诱导ASC凋亡模型, 将ASC细胞分为6组：对照组（无特殊干预），单纯H₂O₂组，CsA或CsA-NP 0.1 mg/ml+ H₂O₂组，CsA或CsA-NP 1.0 mg/ml+ H₂O₂组，CsA或CsA-NP 5.0 mg/ml+ H₂O₂组，CsA或CsA-NP 10.0 mg/ml+ H₂O₂组。观察凋亡细胞形态并计算凋亡率，用流式细胞仪检测ASC细胞凋亡，用细胞计数CCK-8试剂检测细胞活性, 分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性，蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测细胞色素C表达。

结果

细胞形态和生化检测结果显示，采用H₂O₂ (100 μmol/L)能诱导ASC细胞凋亡，但添加CsA或CsA-NP(0.1~10.0 mg/ml) 预处理后细胞凋亡率均明显下降（P<0.01），其中又以5 mg/ml浓度组下降最多（与单纯H₂O₂比较，CsA: 10.6%±2.8%比25.2%±3.8%; CsA-NP: 6.2%±2.6 %比25.2%±3.6%；P均<0.01）。与CsA相同浓度组比较, CsA-NP组在1 mg/ml(8.4%±3.2%比12.1%±3.2%，P<0.05)和5 mg/ml (6.2%±2.6%比10.6%±2.8%，P<0.05) 细胞凋亡率较低；添加CsA或CsA-NP (0.1~10.0 mg/ml)预处理后细胞存活率均明显高于单纯H₂O₂组（P<0.01）。同时检测CsA或CsA-NP保护细胞抗凋亡的可能机制，与单纯H₂O₂组比较，CsA或CsA-NP (0.1~10.0 mg/ml) 预处理后可下调caspase-3活性；与CsA组比较, CsA-NP组在5 mg/ml浓度下调作用更为明显（1.42%±0.12%比1.68%±0.18%，P<0.05）。Western blot结果显示添加CsA或CsA-NP (5 mg/ml)可完全抑制H₂O₂诱导的细胞色素C释放。

结论

CsA-NP预处理能保护ASC抗凋亡,可能机制是减轻细胞凋亡率，提高细胞存活率，下调caspase-3活性和抑制细胞色素C释放。