【摘 要】
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目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法.方法采用SYBR GreenⅠ为实时聚合酶链反应(PCR)指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因(270 bp),
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目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法.方法采用SYBR GreenⅠ为实时聚合酶链反应(PCR)指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因(270 bp),并通过熔解曲线分析确定产物;再以上述片段为模板扩增特定长度的小片段(40/35 bp),以0.5℃/step的速率,获得从65℃到99℃的熔解曲线以检测APC_1309位5 bp缺失突变.结果临床标本检测结果表明:18例结直肠肿瘤患者石蜡组织标本中检出APC_1309位5 bp缺失突变7例,20例正常人外周血标本检测结果均为阴性.结论实时PCR熔解曲线法设计简单,操作简便,结果可靠,可望应用于临床APC基因突变检测,并可推荐用于其他基因突变的检测.
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