目的 探讨以EB病毒(Eptein-Barr virus,EBV)衣壳抗原(VCA)小分子量蛋白p23和p18融合蛋白为抗原,建立检测EBV特异性VCA IgG和IgM抗体的ELISA方法的临床应用价值.方法 采用重叠延伸PCR技术,将p23编码基因BLRF2(氨基酸1～162)和p18编码基因BFRF3的C端(氨基酸105～176)基因序列通过多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列连接获得融合基因p23-p18.融合基因导入原核表达载体获得融合蛋白,经镍-敖合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得融合蛋白,免疫印迹(Western blot,WB)鉴定其特异性.以纯化融合蛋白作为抗原,建立了特异性VCA IgM和IgG间接ELISA检测方法.以该方法对60例传染性单核细胞增多症、56例慢性肾功能不全透析患者和326名健康献血员的血清进行VCA IgG和IgM抗体检测,并与间接免疫荧光(IFA)检测结果进行比较,综合评价融合抗原ELISA检测方法的敏感度、特异度和符合率等指标.结果 (1)融合蛋白鉴定:p23和p18融合基因成功构建并有效表达,WB显示融合抗原与10份VCA特异性IgM阳性血清和10份VCA特异性IgG阳性血清均发生反应,与8份两种抗体均阴性血清不发生反应.(2)临床检验:融合抗原EIJSA和IFA同时检测上述442份标本.以IFA为标准,融合抗原检测VCA IgG的敏感度、特异度和准确性分别为97.3%(392/403)、97.4%(38/39)和97.3%(430/442);检测VCA IgM的分别为94.2%(65/69)、99.5%(371/373)和98.6%(436/442).结论 融合抗原ELISA特异性强,灵敏度高,可用于临床EBV感染诊断及流行病学调查。
融合抗原ELISA检测EB病毒抗体的临床价值
【摘 要】
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目的 探讨以EB病毒(Eptein-Barr virus,EBV)衣壳抗原(VCA)小分子量蛋白p23和p18融合蛋白为抗原,建立检测EBV特异性VCA IgG和IgM抗体的ELISA方法的临床应用价值.方法 采用重叠延伸PCR技术,将p23编码基因BLRF2(氨基酸1～162)和p18编码基因BFRF3的C端(氨基酸105～176)基因序列通过多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列连接获得融合基
【机 构】
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莱州市人民医院检验科,266021,青岛大学医学院微生物教研室,266021,青岛大学医学院微生物教研室
【发表日期】
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2009年32期
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