【摘 要】
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目的 通过构建转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA(TGFβRⅡ-siRNA)的表达质粒,观察其在肝星状细胞中对TGFβRⅡ的表达抑制效果,为研究其阻断肝纤维化作准备.方法 根据Ambion公
【机 构】
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温州医学院附属第三医院感染科,中南大学湘雅医院感染科
【基金项目】
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浙江省自然科学基金资助项目;温州市科技局资助项目
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目的 通过构建转化生长因子βⅡ型受体小干扰RNA(TGFβRⅡ-siRNA)的表达质粒,观察其在肝星状细胞中对TGFβRⅡ的表达抑制效果,为研究其阻断肝纤维化作准备.方法 根据Ambion公司网上设计软件设计二个siRNA作用靶点,体外合成的相应双链DNA被插入pSilenc er2.1-U6质粒中,以脂质体Metafectene 2000转染HSC-T6细胞,利用RT-PCR法和western-blot分别检测对TGFβRⅡ mRNA和蛋白干扰效果.结果 表达针对TGFβRⅡ-siRNA的siRNA-a和siRNA-b二个质粒是成功构建;与对照组相比,其对TGFβRⅡ mRNA表达分别下调到0.89±0.06和0.25±0.03,对TGFβRⅡ蛋白表达分别下调到0.86±0.05和0.23±0.02,转染siRNA-b质粒组显著抑制TGFβRⅡ mRNA和蛋白表达(均P0.05).结论 TGFβRⅡ-siRNA能明显抑制TGFβRⅡ的表达.
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