p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

• 作 者: 徐祥 梁华平 刘昕 代佳平 刘琛 罗艳 王正国
• 机 构: 第三军医大学,第三军医大学
• 出 处: 第三军医大学学报
• 发表日期: 2003年2期
• 关键词: P65 DNA结合域 克隆 核因子ΚB 酵母双杂交 自身激活作用 酵母表达 炎症反应 NFκB p65 yeast twohybrid system au
• 基金项目: 国家重点基础研究发展计划(973计划)，国家自然科学基金，重庆市科委科研项目

目的获得NF-κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因,并检测靶基因的表达和自身激活活性.方法利用引物二聚体搭桥技术,扩增p65亚基DNA结合域基因片段,并将其克隆入酵母双杂交载体pGBKT7 DNA-BD.应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109,在SD/-Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况.按尿素/SDS法抽提酵母蛋白,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达.利用液相法和平板法检测阳性转化株β-半乳糖苷酶的活性.结果获得p65 DNA