具有绿色荧光标记的表达T7 RNA聚合酶稳定细胞系的建立

• 作 者: 宋玲玲 李欣 王洪梅 高远东 王立群 仲跻峰 何洪彬
• 机 构: 山东省农业科学院奶牛研究中心,东北农业大学生命科学学院
• 出 处: 安徽农业科学
• 发表日期: 2011年5期
• 关键词: 绿色荧光标记 T7 RNAP 真核表达 GFP T7 RNAP Eukaryotic expression
• 基金项目: 国家转基因重大专项项目（2009ZX08007-006B）, 国家自然科学基金项目（31072160）, 山东省科技攻关项目（2009GG20002032）, 山东省自然基金项目（Y2008D20）, 兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金项目（SKLVBF200806）

[目的]建立具有绿色荧光标记表达T7 RNA聚合酶的稳定细胞系。[方法]从BL21（DE3）大肠杆菌中克隆出T7RNAP基因,定向克隆质粒FG12后,构建了表达T7 RNA聚合酶基因（T7）的Lenti-virus重组质粒FG12-T7 RNAP。用此重组质粒转染293T细胞,WB可检测出瞬时表达的T7 RNAP蛋白;利用辅助质粒对表达T7的非复制型Lenti-virus病毒进行体外包装,所获得的非复制型Lenti-virus病毒感染BHK-21细胞,利用GFP通过流式细胞分选仪筛选表达T7的细胞系,并利