利用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术联合核定位信号(NLS)肽促进增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)入核，提高UTMD介导基因的转染效率。
方法实验分3组：UTMD＋pEGFP组(A组)、UTMD＋NLS肽＋pEGFP组(B组)和阳离子脂质体Lipo3000＋pEGFP组(C组)。FITC荧光标记NLS，核酸染料Cy3标记pEGFP，调整NLS肽与pEGFP不同摩尔比，观测两者最佳结合比值。以最佳超声辐照参数及NLS肽/pEGFP摩尔比转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。转染6 h后，用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分别评价Cy3标记质粒的入胞率和入核率。转染48 h后，用流式细胞仪检测转染效率，CCK8检测细胞存活率，RT-PCR和Western分别检测mRNA和蛋白的相对表达量，并比较三组间的差异以评价NLS肽在UTMD介导基因转染中的增强效应。
结果①转染6 h后，带绿色荧光的NLS肽和红色荧光的pEGFP均能在细胞同一部位显示且强度信号一致，提示两者相互结合；琼脂糖凝胶电泳示最佳NLS肽/pEGFP结合摩尔比为104∶1。②转染6 h后，A、B、C三组质粒的入胞率分别为(63±12)%、(80±10)%和(92±8)%，入核率分别为(17±3)%、(50±12)%和(35±8)%，差异均有统计学意义(P均<0.05)，B组入胞率和入核率分别为A组的1.3倍和2.9倍，C组分别为A组的1.5倍和2.1倍。③转染48 h后，三组细胞活性均>80%，转染效率、mRNA和蛋白表达的相对量均依次增加，差异均有统计学意义(P均<0.05)，B组分别为A组1.6倍、2.3倍和2.4倍，但仍低于C组。
结论NLS联合UTMD能提高pEGFP入核率，从而提高转染效率，NLS肽发挥增强效应为UTMD介导转染提供新策略。