【摘 要】
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目的构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素(HpaA)的重组质粒,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值.方法用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩
【机 构】
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重庆医科大学微生物学教研室,重庆,400016;大理学院微生物学及免疫学教研室
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目的构建表达幽门螺杆菌临床株粘附素(HpaA)的重组质粒,在大肠杆菌中表达获得重组蛋白,探讨重组蛋白作为Hp抗原在感染诊断中的价值.方法用PCR方法从幽门螺杆菌临床株DNA中扩增HpaA基因片段.克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达,表达产物经纯化和Western blot鉴定后,作为Hp抗原,ELISA法对100例临床标本进行相应抗体检测,并与细菌培养、组织学染色和快速尿素酶试验比较来评价其应用的可行性.结果经酶切、测序分析插入的基因片段全长783bp,与基因文库中的粘附素基因同源性达98.87%.表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子量(Mr)约为30000,可溶性表达占全菌的41.67%以上,经亲和层析后可获得纯度为90%以上的重组蛋白.Western blot证实了其免疫反应性.通过对临床病例的检测结果显示细菌培养、组织学染色、快速尿素酶试验和HpaA抗体检测的敏感性、特异性和准确性分别为100.0%和80.9%;100.0%;和90.5%;90.5%和85.8%;93.3%和85.9%,相差不多.结论 HpaA能在大肠杆菌中高效表达,具有较强的免疫反应性,作为检测试剂敏感性和特异性均较好,有望成为Hp新的非侵入性的检测方法.
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