利用慢病毒表达载体干扰梅花鹿角柄骨膜细胞P21基因

来源 :吉林农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhan99zhan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
利用慢病毒干扰系统,对东北梅花鹿角柄骨膜干细胞(PP细胞)P21基因进行干扰。结果表明:筛选出的2条针对梅花鹿P21基因的siRNA与载体质粒PLVTHM连接成功,并与pMD2.G、pCMV-dr8.9质粒共转染到293t细胞,获得重组慢病毒;通过感染PP细胞并利用流式细胞仪进行分选,获得了纯度90%以上的感染细胞;荧光定量RT-PCR检测表明P21基因的mRNA水平大幅度下调,干扰效率达到70%。表明成功干扰了P21基因在PP细胞中的表达,获得了低表达P21的PP细胞系。“,”P21 gene of the pedicle periosteal cells of sika deer was interfered using RNAi in lentiviral vector system .The results showed that:(1 )Two sequences of small interfering RNAs,targeting P21 gene of sika deer,were successfully reassembled into the lentiviral plasmids(Plvthm).Positive clones were identified based on the results of both PCR and sequencing .Recombinant lentivirus was acquired by each positive plasmid co-transfecting into 293 T cells with the plasmids pMD2 .G and pCMV-dr8.9;(2)Recombinant lentivirus was successfully interfered into the PP cells,and the GFP positive cell pro-portion obtained by flow cytometry (FCM)sorting was about 90%;(3)The result of RT-PCR showed that the expression level of P21 mRNA in cells infected with recombinant lentiviral was obviously de-creased,and the interferential efficiency was about 70%.Therefore,in this study,we successfully inter-fered the expression of P21 gene in the pp cells,and obtained pp cell line with decreased expression of P21 gene,which lays foundation for revealing the regulatory mechanism of P21 underlying antler regener-ation .
其他文献
期刊
  中国养殖珍珠产量占全球珍珠总产量的98%以上,产值却占全球珍珠总产值的10%以下。2010年中国珍珠首饰销售额只占珠宝首饰3%,如果可以提高到10%,国内珍珠市场将发生翻天覆地
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
期刊
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
期刊
臭氧生物活性炭饮用水深度处理慢慢的成为了一种特别优异的净水工艺,并且在国内国外得到越来越广泛的应用.臭氧生物活性炭净水工艺主要是通过臭氧投加量的控制以及工艺流程的
期刊
期刊
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
期刊
后期维护是建筑工程综合管理工作中的重要构成元素,后期维护质量能够对建筑工程的整体管理水平进行直观的反映.所以在开展建筑工程建设的过程中,应该注意后期维护的重要性,并