长寿保障同源基因2诱导Hepa1-6肝癌细胞G0/G1期阻滞的作用及其机制

• 作 者: 杨小理 余云艳 欧阳旭红 向加林 程晓明 杨艳
• 机 构: 563003 遵义医学院附属医院,563006 遵义医学院检验医学院2015级,563003 遵义医学院附属医院,563003 遵义医学院附属医院,563003 遵义医学院附属医院甲乳外科,56300
• 出 处: 中华实验外科杂志
• 发表日期: 2018年35期
• 关键词: 长寿保障同源基因2 原发性肝细胞癌 细胞周期 核转录因子κB亚基p65 细胞周期蛋白D1

目的

探讨长寿保障同源基因2(Lass2)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6细胞周期的影响及其机制。

方法

将前期成功构建的pEGFP-Lass2采用脂质体转染法转染Hepa1-6肝癌细胞48 h，流式细胞术碘化丙锭(PI)法检测各组(阴性对照、空载、实验组)细胞周期，实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和Western blot法检测Lass2、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA及蛋白相对表达水平，并Western blot法检测核NF-κB p65磷酸化(NF-κB p-p65)表达水平；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活性；为进一步验证且明确其机制，利用Hepa1-6细胞悬液肝内注射法，构建C57BL/6J小鼠原位肝癌模型，采用流体力学尾静脉分次加强注射裸质粒，转染后分别提取各组小鼠肝组织总RNA、总蛋白及核蛋白，FQ-PCR、Western blot法验证Lass2、Cyclin D1、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达水平、NF-κB p65磷酸化水平。

结果

Hepa1-6肝癌细胞实验组Lass2 mRNA及蛋白相对表达水平较阴性对照组、空载组明显上调(mRNA：F＝1 486.895，均P＝0.000；蛋白：F＝55.964，均P＝0.000)，细胞周期G₀/G₁期百分比明显增高(F＝239.867，均P＝0.000)、G₂/M期和S期明显减少(FG₂/M＝13.462，PG₂/M＝0.003，0.005；F_S＝46.207，均P＝0.000)，同时下调实验组NF-κB p65、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平(mRNA：F_{NF-κB p65}＝29.993，F_{Cyclin D1}＝113.260，均P＝0.000；蛋白：F_{NF-κB p65}＝17.679，P＝0.003，0.002；F_{Cyclin D1}＝176.357，均P＝0.000)，NF-κBp-p65蛋白磷酸化水平明显抑制(F_{NF-κB p-p65}＝33.817，P＝0.000)。

结论

Lass2基因使肝癌细胞Hepa1-6的细胞周期阻滞于G₀/G₁期，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的激活，下调Cyclin D1的转录与蛋白表达有关。