【摘 要】
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通过RP-HPLC同时检测酶水解反应前后底物5-吲哚甲基海因及产物D-氨甲酰-N-色氨酸的含量变化,不仅可以检测海因酶的活性,还能分析酶反应过程的转化效率.采用Merck公司的Purosp
【基金项目】
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新一代生物催化和生物转化的科学基础;
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通过RP-HPLC同时检测酶水解反应前后底物5-吲哚甲基海因及产物D-氨甲酰-N-色氨酸的含量变化,不仅可以检测海因酶的活性,还能分析酶反应过程的转化效率.采用Merck公司的Purospher STAR RP-C18e色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以乙腈-20mmoL/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比25:75)为流动相,磷酸调pH值为3.0,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为220 nm,于10 min内很好地实现了各组分的分离.采用外标法进行定量分析,D-色氨酸、5-吲哚甲基海因和D-氨甲酰-N-色氨酸的线性范围分别是0.10～1.00mg/mL(r=0.999 1)、0.20～2.00mg/mL(r=0.9989)、0.20-2.00mg/mL(r=0.998 9);酶反应体系中5-吲哚甲基海因和D-氨甲酰-N-色氨酸的加标回收率分别为99.3%～100.2%和98.0%～99.3%,精密度分别为0.51%～0.87%和0.43%～0.94%.试验结果表明该法快速简便、准确可靠.
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