【摘 要】
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摘要：旨在研究猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，简称Mhp）纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白（flagellin，简称F）-霍乱毒素B亚基（cholera toxin B subunit，简称CTB）2种重组蛋白对口蹄疫（foot-and-mouth disease，简称FMD）灭活疫苗的免疫增强作用。通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-
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摘要：旨在研究猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，简称Mhp）纤毛黏附因子P97以及F7鞭毛蛋白（flagellin，简称F）-霍乱毒素B亚基（cholera toxin B subunit，简称CTB）2种重组蛋白对口蹄疫（foot-and-mouth disease，简称FMD）灭活疫苗的免疫增强作用。通过体外表达获得pCold-F7-CTB、pET32a-P97-R1 2种重组蛋白，用间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）方法检测pCold-F7-CTB蛋白的生物學活性，将重组蛋白分别与口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，简称FMDV）灭活抗原、口蹄疫灭活疫苗混合制备，皮下或腹腔接种Balb/c小鼠，共免疫2次，间隔3周。分别于免疫前、免疫后21、35、49 d采血，49 d后无菌摘取脾脏。采用阻断ELISA的方法检测小鼠血清口蹄疫O型病毒免疫球蛋白（IgG）抗体滴度，用流式细胞术检测脾淋巴细胞亚型比例，以评估免疫效力。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western Blot）分析结果表明，2种重组蛋白成功表达。用GMl（神经节苷脂）-ELISA方法验证pCold-F7-CTB的生物学活性，发现融合蛋白F7-CTB保留了与GMl的结合能力。小鼠免疫试验结果表明，经皮下注射接种后，单独口蹄疫病毒灭活抗原组没有产生明显的抗体水平，而F7-CTB免疫增强剂组比单独口蹄疫病毒灭活抗原组的IgG滴度更高。在试验中发现，当重组蛋白与口蹄疫灭活疫苗联合使用时，血清中的IgG滴度明显增高，CD3 CD8 T淋巴细胞比值上升;P97和F7-CTB混合使用对口蹄疫灭活疫苗的免疫增强效果最佳。可以初步得出，免疫增强剂P97和F7-CTB具有协同作用，皮下注射可显著提高FMD的特异性IgG水平，CD3 CD8 T淋巴细胞比值升高，显示其具有良好的应用前景。
关键词：口蹄疫;P97;F7-CTB;免疫增强剂
中图分类号： S855.3
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