【摘 要】
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目的 克隆人乳酸脱氢酶B（LDH-B）基因并构建其真核表达载体。方法 提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA,逆转录生成c DNA,以c DNA为模板,采用PCR扩增获得LDH-B基因编码区序列片
【机 构】
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西南医科大学:临床医学院,西南医科大学生物化学与分子生物学实验室
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目的 克隆人乳酸脱氢酶B（LDH-B）基因并构建其真核表达载体。方法 提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA,逆转录生成c DNA,以c DNA为模板,采用PCR扩增获得LDH-B基因编码区序列片段,限制性核酸内切酶Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切LDH-B基因片段及p UC19质粒,连接反应构建p UC19-LDH-B克隆载体,并将其转入大肠埃希菌DH5α感受态细胞,蓝白筛选挑取白色菌落,酶切验证后测序鉴定。将序列正确的LDH-B基因亚克隆到pc DNA3.1（-）载体上,构建LDH-B真核表达载
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