【摘 要】
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目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变.构建SARI基因
【机 构】
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福建医科大学医学技术与工程学院,福建福州,350004福建省妇幼保健院,福建福州,350001;
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目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变.构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞.采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果.设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE)3组.MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleaved-PARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化.结果:Kasumi-1细胞具有c-KITN822K突变.成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞.与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达;Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高;PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3 K/Akt通路蛋白p-PI3 K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P＜0.05).结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3 K/Akt信号通路失活有关.
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