α1,3GT siRNA打靶杂合子猪肝细胞阴性表达半乳糖转移酶

• 作 者: 严泉剑 张元芳 杨捷 丁强 王继功 姜昊文 赵鸿 徐可 龚健 李六金 刘海军 郭金龙 刘恩靖
• 机 构: 200040,上海,复旦大学华山医院泌尿外科,200040,上海,复旦大学华山医院泌尿外科,西安,第四军医大学实验动物中心,200040,上海,复旦大学华山医院泌尿外科,200040,上海,复旦大学华
• 出 处: 中华肝脏病杂志
• 发表日期: 2004年12期
• 关键词: 半乳糖转移酶 基因打靶 RNA 干扰 肝细胞

目的 研究联合应用基因敲除及RNA干扰(siRNA)技术对猪α 1,3半乳糖转移酶(α 1,3GT)基因修饰后,阳性猪杂合子(+/)肝细胞的G T基因是否获得有效沉默并影响人天然抗体介导的细胞毒性作用.方法用pPNTloxPneo和pMXSV/U6载体构建猪GT基因敲除并siRNA载体,转染中国实验用小型猪的肝细胞,筛选获取杂合子克隆(+/).Northern blot检测GT mRNA表达,四甲基偶氮唑盐方法评估天然抗体细胞毒性.结果野生型和pPNTloxPGT转染的杂合子猪肝细胞的mRNA表达阳性,而pPNTloxPGTsiRNA载体转染的杂合猪肝细胞阴性表达α 1,3 GT mRNA;pPNTloxPGT转染细胞(+/-)和野生型(+/+)猪肝细胞对人天然抗体介导的细胞毒性实验敏感,而pPNTloxPGTsiRNA转染细胞(+/-)则对毒性试验敏感性明显下降,只检测到17%细胞毒性.结论对猪GT联合应用基因敲除及siRNA能够在阳性猪杂合子肝细胞内有效沉默G T基因,降低猪肝细胞对人天然抗体细胞毒的敏感性。