人胰岛淀粉样多肽沉淀细胞模型的体外构建

• 作 者: 徐佳 张宏利 骆天红 田景琰 李果
• 机 构: 上海交通大学医学院瑞金医院上海市内分泌代谢病研究所
• 出 处: 上海交通大学学报：医学版
• 发表日期: 2007年3期
• 关键词: 胰岛淀粉样多肽 基因克隆 真核表达载体 islet amyloid polypeptide gene cloning eukaryotic expressi
• 基金项目: 国家自然科学基金（30571019、30570879、30470817）,上海市教委基金（04BB08）,上海交通大学医学院自然科学研究基金（04XJ21016）

目的构建人胰岛淀粉样多肽（hIAPP）基因真核表达载体，并在无内源性IAPP表达的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株上进行体外表达实验，建立可产生hIAPP沉淀的细胞模型。方法应用RT-PCR技术扩增得到hIAPP cDNA，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1（＋）中，构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-IAPP；随后用lipofectamine 2000介导转染CHO细胞，以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达，以Thiaflavin S染色的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果构建的