【摘 要】
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目的:探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制.方法:提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo),qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达,将10 μg/mL GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo以及等体积的PBS与人成纤维细胞(HKF)共孵育后,qRT-PCR检测HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fib
【机 构】
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新疆维吾尔自治区人民医院肿瘤科,乌鲁木齐830000
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目的:探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制.方法:提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo),qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达,将10 μg/mL GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo以及等体积的PBS与人成纤维细胞(HKF)共孵育后,qRT-PCR检测HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度.双荧光素酶报告基因实验检测miR-221与PTEN的靶向关系,将10μg/mLmiR-NCexo和miR-221 exo与HKF共孵育,将miR-221 exo与HKF共孵育后转染PTEN质粒(miR-221 exo+PTEN),然后检测上述HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fi-bronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达以及细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度.结果:本研究所提取的外泌体符合其结构和生物学特征,miR-221在MGC-803、MKN45和MGC-803 exo、MKN45 exo中高表达.与PBS组比较,MGC-803 exo组和MKN45 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调(均P＜0.001),细胞上清中IL-1[β和IL-6的浓度显著增加(均P＜0.001),双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-221的靶基因.与miR-NC exo组比较,miR-221 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调(均P＜0.001),细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著增加(均P＜0.001);与miR-221 exo组比较,miR-221 exo+PTEN组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著下调(均P＜0.001),细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著降低(P＜0.001).结论:胃癌外泌体miR-221抑制PTEN表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的生成.
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