【摘 要】
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目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化.方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白
【机 构】
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中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所,昆明,650118;云南省公安厅毒品分析及禁毒技术公安部重点实验室,昆明,650228
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目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化.方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫抗原和包被抗原,通过梯度稀释法优化ELISA反应体系中抗原最佳包被浓度和最佳酶标抗体浓度(1:2000-1:6000)等工作条件,并进行方法的稳定性、特异性验证.结果:优化后最佳的包被缓冲液为磷酸缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),2 μg ? ml-1的包被抗原在37℃2 h后4℃包被过夜为最佳包被反应条件,最佳封闭条件为5％脱脂奶粉封闭120 min,最佳酶标抗体稀释度为1:3000(1.33μg·ml-1),最佳孵育时间为60 min,最佳底物显示时间为15 min.该方法重复性实验变异系数均在5％以内,并且只能检测出MA抗体,特异性良好.结论:本研究中的半抗原结构能诱导MA抗体的产生,并成功建立间接ELISA检测MA抗体的最佳工作条件,可为MA疫苗临床前研究奠定基础.
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