【摘 要】
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目的 探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白通过与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)相互作用抑制E-cadherin表达的分子机制.方法
【机 构】
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400010 重庆,重庆医科大学附属第二医院检验科;
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目的 探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白通过与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)相互作用抑制E-cadherin表达的分子机制.方法 转染HCV核心蛋白真核表达质粒至HepG2细胞,并通过G418筛选构建稳定表达HCV核心蛋白的细胞株,以未转染HCV核心蛋白真核表达质粒的细胞作为对照组,采用RT-PCR和Weste blot观测核心蛋白对ZEB2和E-cadherin表达水平的影响;采用荧光素酶报告系统分析核心蛋白对E-cadherin启动子活性的调控作用;通过免疫共沉淀及染色质免疫共沉淀技术检测核心蛋白与ZEB2的相互作用及与E-cadherin启动子的结合情况.结果 与对照组比较,在表达HCV核心蛋白的HepG2细胞中,E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),而ZEB2的蛋白和mRNA表达水平明显增加(P<0.05).转染HCV核心蛋白的HepG2细胞中,E-cadherin启动子介导的荧光素酶活性显著降低(P<0.01),当利用RNA干扰技术敲减ZEB2后,E-cadherin启动子介导的荧光素酶活性明显恢复(P<0.05).免疫共沉淀实验显示,HCV核心蛋白可与ZEB2结合,染色质免疫共沉淀实验表明,HCV核心蛋白增强了ZEB2与E-cadherin启动子的结合.结论 HCV核心蛋白可增强ZEB2的表达并促进其结合至E-cadherin启动子,从而抑制E-cadherin的表达.
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