【摘 要】
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目的:优化抗HBsAg人源抗体片段hFabHB1在大肠杆菌中功能性表达的条件.方法:通过测定宿主菌培养物A600值观察10 g/L的葡萄糖对宿主菌生长的影响;比较诱导前是否更换培养液的2
【机 构】
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江苏省疾病预防控制中心卫生部肠道病原微生物重点实验室,南京市第二医院
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目的:优化抗HBsAg人源抗体片段hFabHB1在大肠杆菌中功能性表达的条件.方法:通过测定宿主菌培养物A600值观察10 g/L的葡萄糖对宿主菌生长的影响;比较诱导前是否更换培养液的2种不同条件hFabHB1的表达产量;比较在37℃和25℃ 2种诱导温度下功能性hFabHB1分子的表达量以及Fd和轻链表达的平衡性.大量表达的功能性hFabHB1分子经亲和层析纯化后,用ELISA鉴定其生物活性.结果:在培养液中加入10 g/L的葡萄糖可有效抑制重组蛋白的本底表达,增加宿主菌的生长速度;在加入IPTG诱导前更换培养液可明显提高hFabHB1的表达产量;25℃的诱导温度比37℃能表达更多的功能性Fab分子,并且Fd和轻链表达量也更趋于平衡.经亲和层析纯化的hFabHB1分子可与HBsAg特异性结合.结论:实验结果为在原核系统中大量表达该抗体片段提供了技术储备.
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