【摘 要】
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为建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,对Erns蛋白一个包含2个预测抗原表位的96氨基酸蛋白编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体pET-Erns8
【机 构】
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西华师范大学生命科学学院,四川南充637002;天津海关,天津300456;海口海关,海南海口 300456
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为建立一种检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体的ELISA方法,对Erns蛋白一个包含2个预测抗原表位的96氨基酸蛋白编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体pET-Erns84-170aa,转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组蛋白表达.将重组Erns4-17aa蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-blot分析其抗原性.结果 显示,重组Erns84-170aa蛋白以完全可溶形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni2+-NTA树脂纯化获得重组Ernss84-170a蛋白的浓度和纯度分别为1.5 mg/mL和94％.Western-blot显示,该重组蛋白对BVDV阳性血清具有很强的抗原反应性.用纯化的重组Erns84-170aa蛋白建立间接ELISA方法(Erns84-170aa-iELISA)的结果显示,所建立方法的最佳抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶5 000,血清D450的阴阳性临界值为0.283;该方法仅对BVDV阳性血清呈特异性反应,对1∶1 280倍稀释的阳性血清仍可检出,批内试验和批间试验的变异系数均小于10％.用该方法对487份牛血清进行BVDV抗体检测,检出128份阳性血清.本研究建立的Erns84-170a-iELISA方法为BVDV抗体检测及流行病学调查提供了一种有效手段.
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