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【摘要】 目的：检测p16与Ki-67在宫颈上皮内瘤变（CIN）和慢性宫颈炎中的表达，探讨其在CIN诊断中的意义。方法：采用免疫组化EnVision法检测15例慢性宫颈炎、65例低级别CIN和47例高级别CIN患者的p16和Ki-67的表达。结果：慢性宫颈炎组的p16及Ki-67染色为阴性或仅散在表达，明显低于低、高级别CIN组（P<0.001），二者表达层次从低级别CIN到高级别CIN逐渐由基底层至表层。p16在低、高级别CIN组间比较差异有统计学意义（P<0.001），Ki-67在低、高级别CIN组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：联合检测宫颈活检标本中p16、Ki-67可以提高宫颈上皮内瘤变的检出率及分级的准确性，有利于慢性宫颈炎症与宫颈上皮内瘤变之间的鉴别。
【关键词】 宫颈上皮内瘤变； 免疫组化； p16； Ki-67
宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宫颈癌的癌前病变。尽管CIN有明确的诊断标准，但是在具体工作中还会遇到很多难以鉴别的情况，如反应性鳞状上皮增生、基底细胞增生、不成熟鳞状上皮化生及老年性萎缩等。本研究应用免疫组化的方法检测宫颈组织中p16和Ki-67的表达，探讨其在宫颈炎和CIN诊断中联合检测的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集本院病理科2013年1月-2015年3月间慢性宫颈炎及CIN患者的资料及蜡块，由2位高年资病理医师复查HE切片并证实。患者年龄18～65岁，平均42.5岁。其中低级别组（CINI组）65例，高级别组（CINⅡ、CINⅢ组）47例，慢性宫颈炎组（阴性对照组）15例，两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法及试剂 采用免疫组化EnVision法。切片常规脱蜡、脱水，剩余步骤在自动免疫组化仪上进行。染色具体步骤按照仪器操作说明书进行。所用抗体p16及Ki-67均购自上海罗氏公司。
1.3 结果判定 p16以宫颈鳞状上皮基底和副基底层细胞的连续性染色，有或没有表面细胞染色，判断为（+）；孤立细胞或小的细胞簇染色，即非连续的着色，特别是基底和副基底层的鳞状细胞没有着色，判断为（-）。Ki-67阳性为胞核着色，阳性细胞仅位于基底层及副基底层或阳性细胞数≤5%者为（-）；Ki-67阳性患者中，阳性细胞数为6%～25%者为（+）；26%～50%者为（++）；>50%者为（+++）[1]。本文将阳性强度在（+）以上者列为阳性细胞。
1.4 统计学处理 运用SPSS 16.0统计软件对所得数据进行统计学处理，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组p16及Ki-67阳性率比较 慢性宫颈炎中p16为阴性，在CIN中p16大部分呈阳性（88/112），低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义（P<0.001）。高级别CIN组p16阳性率显著高于低级别CIN组，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。Ki-67在慢性宫颈炎组仅见少量表达，在CIN组表达增加（106/112），低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义（P<0.001）。低级别CIN组与高级别CIN组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 病理结果比较 在慢性宫颈炎中p16为阴性，鳞状上皮Ki-67基底细胞（+）；低级别CIN中p16阳性细胞局限于宫颈鳞状上皮的下1/3，在高级别CIN中阳性细胞累及甚至超过上皮下2/3层或全层弥漫阳性。随着病变程度的加重，Ki-67表达范围及阳性强度都有所提高，低级别CIN主要为鳞状上皮层下1/3的细胞核着色，呈黄褐色；高级别CIN主要为鳞状上皮层下2/3至全层细胞核着黄褐色，呈强阳性（图1～3）。
3 讨论
宫颈上皮内瘤变（CIN）根据鳞状上皮异型增生的程度分为三级：CINⅠ级相当于轻度非典型增生，CINⅡ级相当于中度非典型增生，CINⅢ级相当于重度非典型增生和原位癌[2]。发生CIN主要的危险因素是HPV感染。宫颈病变中HPV16、18感染与p16的过度表达呈正相关[3]。
p16基因又称多肿瘤抑制基因，为细胞周期依赖性激酶（CDK）抑制蛋白，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，当p16基因突变致结构和功能缺失时，可刺激细胞分裂，引起细胞的非典型增生，甚至癌变[4]。本研究发现p16在慢性宫颈炎不表达或呈不连续的点灶状的表达，在CIN病变中表达增加。p16表达在低级别到高级别CIN中呈逐渐增高的趋势，比较差异有统计学意义（P<0.001）。p16的阳性部位位于细胞浆和细胞核，呈现弥漫阳性的表达方式，棕黄色，在低级别CIN中弥漫表达于鳞状上皮的下1/3层，高级别CIN中表达于鳞状上皮的下2/3层甚至全层，弥漫性强阳性。对于炎症背景较重而CIN病变范围较小的宫颈活检标本，p16阳性标记可以检出部分漏诊的病例，p16阳性的范围可以帮助判断CIN的级别。
Ki-67是一种反映细胞增殖程度的核抗原，在细胞增殖周期的G1、S、G2及M期表达，细胞有丝分裂后该蛋白含量迅速减少，在G0期不表达[5]。本研究结果显示Ki-67在慢性宫颈炎、低级别上皮内瘤变及高级别上皮内瘤变中的阳性率分别为13%、90%和100%，慢性宫颈炎阴性表达或仅表达于基底层细胞，在鳞状上皮乳头状增生区域其表达有所增加，此时联合应用p16对于鉴别低级别CIN有一定的帮助。低、高级别CIN组Ki-67阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05），故联合应用p16对于CIN的分级尤为重要。
综上所述，联合检测p16和Ki-67可以帮助病理医师鉴别慢性宫颈炎及CIN，提高CIN诊断准确性，降低误诊率。
参考文献
[1]史健，郑军生，尹方，等.宫颈上皮内瘤变p16、p53、Ki-67的表达与高危型HPV感染及其临床意义[J].南方医科大学学报，2007，27（4）：515-517.
[2]陈乐真.妇产科诊断病理学[M].北京：人民军医出版社，2010：117.
[3]邹先进，蔡兰，刘颖，等.子宫颈癌前病变与子宫颈癌组织中p16INK4A蛋白检测及其与人乳头状瘤病毒感染的关系[J].中华妇产科杂志，2004，39（9）：625-626.
[4]旦慧文，戴淑真.p53、p16、PTEN基因在宫颈癌中的作用[J].中国误诊学杂志，2005，5（7）：1226-1228.
[5]王岩，刘晓霞.上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中Ki67、p16的异常表达[J].宁夏医学杂志，2002，24（11）：649-651.
（收稿日期：2015-04-07） （本文编辑：王宇）
【关键词】 宫颈上皮内瘤变； 免疫组化； p16； Ki-67
宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宫颈癌的癌前病变。尽管CIN有明确的诊断标准，但是在具体工作中还会遇到很多难以鉴别的情况，如反应性鳞状上皮增生、基底细胞增生、不成熟鳞状上皮化生及老年性萎缩等。本研究应用免疫组化的方法检测宫颈组织中p16和Ki-67的表达，探讨其在宫颈炎和CIN诊断中联合检测的价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集本院病理科2013年1月-2015年3月间慢性宫颈炎及CIN患者的资料及蜡块，由2位高年资病理医师复查HE切片并证实。患者年龄18～65岁，平均42.5岁。其中低级别组（CINI组）65例，高级别组（CINⅡ、CINⅢ组）47例，慢性宫颈炎组（阴性对照组）15例，两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法及试剂 采用免疫组化EnVision法。切片常规脱蜡、脱水，剩余步骤在自动免疫组化仪上进行。染色具体步骤按照仪器操作说明书进行。所用抗体p16及Ki-67均购自上海罗氏公司。
1.3 结果判定 p16以宫颈鳞状上皮基底和副基底层细胞的连续性染色，有或没有表面细胞染色，判断为（+）；孤立细胞或小的细胞簇染色，即非连续的着色，特别是基底和副基底层的鳞状细胞没有着色，判断为（-）。Ki-67阳性为胞核着色，阳性细胞仅位于基底层及副基底层或阳性细胞数≤5%者为（-）；Ki-67阳性患者中，阳性细胞数为6%～25%者为（+）；26%～50%者为（++）；>50%者为（+++）[1]。本文将阳性强度在（+）以上者列为阳性细胞。
1.4 统计学处理 运用SPSS 16.0统计软件对所得数据进行统计学处理，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组p16及Ki-67阳性率比较 慢性宫颈炎中p16为阴性，在CIN中p16大部分呈阳性（88/112），低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义（P<0.001）。高级别CIN组p16阳性率显著高于低级别CIN组，两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。Ki-67在慢性宫颈炎组仅见少量表达，在CIN组表达增加（106/112），低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义（P<0.001）。低级别CIN组与高级别CIN组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 病理结果比较 在慢性宫颈炎中p16为阴性，鳞状上皮Ki-67基底细胞（+）；低级别CIN中p16阳性细胞局限于宫颈鳞状上皮的下1/3，在高级别CIN中阳性细胞累及甚至超过上皮下2/3层或全层弥漫阳性。随着病变程度的加重，Ki-67表达范围及阳性强度都有所提高，低级别CIN主要为鳞状上皮层下1/3的细胞核着色，呈黄褐色；高级别CIN主要为鳞状上皮层下2/3至全层细胞核着黄褐色，呈强阳性（图1～3）。
3 讨论
宫颈上皮内瘤变（CIN）根据鳞状上皮异型增生的程度分为三级：CINⅠ级相当于轻度非典型增生，CINⅡ级相当于中度非典型增生，CINⅢ级相当于重度非典型增生和原位癌[2]。发生CIN主要的危险因素是HPV感染。宫颈病变中HPV16、18感染与p16的过度表达呈正相关[3]。
p16基因又称多肿瘤抑制基因，为细胞周期依赖性激酶（CDK）抑制蛋白，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，当p16基因突变致结构和功能缺失时，可刺激细胞分裂，引起细胞的非典型增生，甚至癌变[4]。本研究发现p16在慢性宫颈炎不表达或呈不连续的点灶状的表达，在CIN病变中表达增加。p16表达在低级别到高级别CIN中呈逐渐增高的趋势，比较差异有统计学意义（P<0.001）。p16的阳性部位位于细胞浆和细胞核，呈现弥漫阳性的表达方式，棕黄色，在低级别CIN中弥漫表达于鳞状上皮的下1/3层，高级别CIN中表达于鳞状上皮的下2/3层甚至全层，弥漫性强阳性。对于炎症背景较重而CIN病变范围较小的宫颈活检标本，p16阳性标记可以检出部分漏诊的病例，p16阳性的范围可以帮助判断CIN的级别。
Ki-67是一种反映细胞增殖程度的核抗原，在细胞增殖周期的G1、S、G2及M期表达，细胞有丝分裂后该蛋白含量迅速减少，在G0期不表达[5]。本研究结果显示Ki-67在慢性宫颈炎、低级别上皮内瘤变及高级别上皮内瘤变中的阳性率分别为13%、90%和100%，慢性宫颈炎阴性表达或仅表达于基底层细胞，在鳞状上皮乳头状增生区域其表达有所增加，此时联合应用p16对于鉴别低级别CIN有一定的帮助。低、高级别CIN组Ki-67阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05），故联合应用p16对于CIN的分级尤为重要。
综上所述，联合检测p16和Ki-67可以帮助病理医师鉴别慢性宫颈炎及CIN，提高CIN诊断准确性，降低误诊率。
参考文献
[1]史健，郑军生，尹方，等.宫颈上皮内瘤变p16、p53、Ki-67的表达与高危型HPV感染及其临床意义[J].南方医科大学学报，2007，27（4）：515-517.
[2]陈乐真.妇产科诊断病理学[M].北京：人民军医出版社，2010：117.
[3]邹先进，蔡兰，刘颖，等.子宫颈癌前病变与子宫颈癌组织中p16INK4A蛋白检测及其与人乳头状瘤病毒感染的关系[J].中华妇产科杂志，2004，39（9）：625-626.
[4]旦慧文，戴淑真.p53、p16、PTEN基因在宫颈癌中的作用[J].中国误诊学杂志，2005，5（7）：1226-1228.
[5]王岩，刘晓霞.上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中Ki67、p16的异常表达[J].宁夏医学杂志，2002，24（11）：649-651.
（收稿日期：2015-04-07） （本文编辑：王宇）