【摘 要】
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构建载体表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3,GPC3）蛋白,用以获得抗GPC3单克隆抗体。用PCR技术扩增GPC3基因,利用酶切位点将该序列插入p3XFLAG-CMV-14载体,构建p CMV-gpc3表
【机 构】
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河北省科学院生物研究所,中国科学院北京基因组研究所
【基金项目】
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河北省科学院高层次人才资助项目(20150503LR62-9);河北省科学院科技计划项目(13335)
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构建载体表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3,GPC3）蛋白,用以获得抗GPC3单克隆抗体。用PCR技术扩增GPC3基因,利用酶切位点将该序列插入p3XFLAG-CMV-14载体,构建p CMV-gpc3表达载体。通过脂质体将该载体转染至HEK293细胞中,利用Western blot技术检测最终结果。收集稳定表达的细胞,破碎,通过亲和层析柱,获得纯度较高的GPC3蛋白。成功构建p CMV-gpc3真核表达载体,转染至HEK293细胞后,经G418筛选获得稳定表达的单克隆细胞系;Western
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