【摘 要】
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目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA 表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9 基因的表达.方法:针对人MYH9 基因序列,构建siRNA 表达质粒,通过酶切和测序
【机 构】
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中国药科大学中药复方研究室,江苏,南京,210038国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏,南京,210046;中国药科大学中药复方研究室,江苏,南京,210038;
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目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA 表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9 基因的表达.方法:针对人MYH9 基因序列,构建siRNA 表达质粒,通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性.分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1/2/3 至HUVEC 细胞,通过半定量RT-PCR 和蛋白质印迹,分别检测在转染后24 h、 48 h、 72 h MYH9 在mRNA 转录水平及蛋白表达的变化.结果:在构建的3种重组质粒中,pGCsi-MYH9-2、 pGCsi-MYH9-3在转染后24 h 均表现出一定的干扰作用,转染后48 h干扰作用最强,转染后72 h 干扰作用减弱;pGCsi-MYH9-3的干扰作用最明显,转染后48 h,能明显下调HUVEC 的MYH9 蛋白表达,抑制率平均可达71.2%,此时MYH9 基因mRNA 转录明显减少,抑制率为86.5%.结论:在转染后48 h pGCsi-MYH9-3 可明显抑制HUVEC 细胞内源MYH9 的表达,为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础.
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