小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需siRNA的筛选

• 作 者: 周龙 王立林 胡序怀
• 机 构: 深圳市卫生健康发展研究中心,南方医科大学附属深圳妇幼保健院麻醉科,深圳市血液中心
• 出 处: 中国当代医药
• 发表日期: 2019年8期
• 关键词: 小鼠原代肝细胞 PTEN磷酸水解酶 小干扰RNA 胰岛素抵抗
• 基金项目: 广东省深圳市科技计划项目(医疗卫生类)(201605019)

目的筛选出小鼠原代肝细胞中PTEN基因沉默所需的高效siRNA。方法采用两步胶原酶灌注法分离小鼠原代肝细胞,放入25cm^2胶原包被瓶中(1×10^6个/瓶),均分为5组:对照组(C组)、阴性对照组(NC组)、siR-996组、siR-1381组、siR-1519组。采用HiPerFect转染试剂将各组对应的siRNA序列转入小鼠原代肝细胞,24h后提取RNA和蛋白,通过Real-timePCR检测各组PTENmRNA表达,通过Westernblot检测各组PTEN蛋白含量。结果siR-996组