【摘 要】
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目的 建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证.方法 建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6 μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,北京102629;岛津企业管理(中国)有限公司,北京100020
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目的 建立多糖疫苗中十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)和去氧胆酸(deoxycholic acid,OBA)残留量的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测方法,并进行验证.方法 建立以Kinetex色谱柱C18(2.1 mm×50 mm,2.6 μm)为固定相,5 mmol/L甲酸铵、乙腈为流动相的LC-MS/MS法,并验证方法的线性范围、精密性、准确度、检出限及定量限.采用建立的方法检测23批肺炎球菌多糖(1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17A、18C、19A、19F、20、22F、23F和33F)、3批b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)粗糖和精糖、3批A、C、Y、W135群脑膜炎球菌粗糖和精糖中CTAB及OBA残留量.结果 CTAB浓度在1.56～50μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=133056X-29015,Re=0.9999;OBA浓度在6.25～100 μg/L范围时,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=250.5 X-59.1,R2=0.9997;OBA及CTAB对照品6次重复进样检测的保留时间和峰面积RSD均＜2％;OBA和CTAB加标回收率均在91.8％～103.5％之间;OBA的检出限为1.02μ g/L,定量限为2.04 μg/L,CTAB的定量限为1.56 μg/L.4、9N、9V和15B型肺炎球菌多糖无明显CTAB检出,其他血清型均有不同程度检出;大部分血清型肺炎球菌多糖中无明显OBA检出.3批A、C、Y、W135脑膜炎球菌粗糖中CTAB残留量为112.40～1709.60 μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量为0.08～ 43.20 μg/L.3批Hib粗糖中CTAB残留量分别为1265.10、1189.00和1513.30 μg/L,对应批次精糖中CTAB残留量分别为6.50、166.60、6.65 μg/L.结论 建立了多糖疫苗中CTAB和OBA的LC-MS/MS检测方法,该方法具有良好的精密性及准确度,可用于多糖疫苗及多糖结合疫苗中CTAB和OBA残留量的检测.
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