【摘 要】
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目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表
【机 构】
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吉林医药学院检验学院实验中心; 吉林大学中日联谊医院神经外科; 吉林医药学院抗体中心;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目资助课题(81771304);国家自然科学基金青年项目资助课题(81601234,81601073);吉林省财政厅省直卫生专项项目资助课题(SCZSY201616);吉林省中医药管理局科研项目资助课题(2019140);吉林省吉林市科技创新发展计划项目资助课题(201750246);吉林省大学生创新创业项目资助课题(201837)
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目的:构建水通道蛋白4 (AQP4)真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法:采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组(未转染重组质粒的V79细胞)和转染组(转染重组质粒的V79细胞)。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎(NMO)患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果:成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高(P<0.05)。结论:成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。
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