【摘 要】
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体外区室化(In vitro compartmentalization,IVC)是通过制备微液滴反应小室包裹单个基因(包含表达体系)或细胞进行反应和培养,从而建立表现型与基因型的偶联,并借助流式细胞
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院,天津300457中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津300308;中国科学院天津工业生物技术研究所中国科学院系统微生物工程重点实验室,天津
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体外区室化(In vitro compartmentalization,IVC)是通过制备微液滴反应小室包裹单个基因(包含表达体系)或细胞进行反应和培养,从而建立表现型与基因型的偶联,并借助流式细胞仪(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)对液滴进行超高通量检测和筛选,进而快速获得目标基因或细胞的一种方法.IVC-FACS筛选方法已被广泛应用于蛋白质工程、酶工程等定向进化研究.但早期利用机械分散法生成的微液滴大小均一性难以控制,严重影响液滴的定量检测,降低了筛选的效率和准确性.随着微流控芯片制备技术的快速发展,在芯片内快速生成微液滴的技术也愈加成熟.本研究首先利用W/O (Water-in-oil)单层液滴生成芯片高速制备单分散的W1/O液滴,再将W1/O液滴重注入W/O/W (Water-in-oil-in-water)双层乳化液滴生成芯片制备均一的W1/O/W2双层乳化液滴.通过对油、水相流速与比值的优化,可以生成直径在15.4-23.2 μm的单乳化微液滴,液滴可在培养数天内保持稳定.将单乳化液滴重注入双层乳化液滴芯片,通过调整油相流速,可以获得生成速度在1 000个液滴/s、直径在30-100 μm的双层乳化液滴.利用双层乳化液滴包埋的大肠杆菌细胞能正常进行培养和目标蛋白的诱导表达,为后续建立基于液滴和流式细胞仪的菌株高通量筛选方法奠定基础.
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