【摘 要】
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目的 构建E3泛素化连接酶环指与WD重复结构域蛋白(RING finger and WD repeat domain,RFWD3)的慢病毒表达载体,研究RFWD3对宫颈癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以宫颈癌HeL
【机 构】
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南京医科大学病原微生物学系,江苏南京211166
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目的 构建E3泛素化连接酶环指与WD重复结构域蛋白(RING finger and WD repeat domain,RFWD3)的慢病毒表达载体,研究RFWD3对宫颈癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以宫颈癌HeLa细胞的cDNA为模板扩增RFWD3基因片段,利用DNA重组技术,将上述片段克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(简称pCDH)中,构建pCDH-RFWD3重组真核表达质粒.经酶切及测序验证准确后,采用三质粒慢病毒包装系统包装RFWD3病毒,通过梯度稀释法感染人胚肾上皮细胞(293T)检测病毒滴度.随后采用RFWD3慢病毒液感染宫颈癌HeLa细胞,运用Western blot实验检测慢病毒转导后HeLa细胞中RFWD3蛋白的表达水平,进一步通过CCK-8和细胞划痕实验检测过表达RFWD3蛋白对HeLa细胞增殖与迁移能力的影响.结果 可表达RFWD3蛋白的pCDH-RFWD3慢病毒载体获成功构建.包装RFWD3慢病毒,建立稳定表达RFWD3蛋白的宫颈癌HeLa细胞系.RFWD3慢病毒转导后的HeLa细胞与对照细胞相比,其细胞增殖与迁移能力显著增强(P＜0.05).结论 RFWD3能够显著增强宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移能力.
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