植物microRNA功能瞬时验证体系的建立

• 作 者: 赵文婷 高志晖 孟冬 刘晓东 魏建和
• 机 构: 中国医学科学院&,北京协和医学院药用植物研究所,东北林业大学,中国农业大学,中国医学科学院&,北京协和医学院药用植物研究所海南分所（海南省南药资源保护与开发重点实验室）
• 出 处: 生物技术通讯
• 发表日期: 2014年1期
• 关键词: microRNA 靶基因 瞬时表达体系 农杆菌注射
• 基金项目: 国家自然科学基金(81001607,81173481);教育部新世纪优秀人才支持计划(2008);协和学者特聘教授计划(医科人发[2012]282号)

目的：建立植物microRNA（miRNA）功能的瞬时活体验证体系，并检验该体系的有效性。方法：选用双元表达载体pcAMBIA1200，并插入烟草花叶病毒双35s启动子，以驱动目标miRNA超表达；选用双元表达载体pFGC5941的绿色荧光蛋白（GFP）改造载体用于潜在的靶基因与GFP融合蛋白的超表达，以转入这2种载体的农杆菌侵染烟草叶片，观察GFP融合蛋白的荧光，作为验证miRNA对其潜在靶基因调控作用的瞬时验证体系。选取拟南芥已知功能的miR393及其靶基因A船3，分别构建pcAMBIA1200-35