论文部分内容阅读
摘要：当前，从灵芝中提取粗多糖的方法有很多种，本文就从乙醇沉淀多糖的稀碱溶液提取法（稀碱法1）、沸水提取法、加酸乙醇沉淀多糖的稀碱溶液提取法（稀碱法2）以及行标法这四种灵芝粗多糖的提取方法进行分析，计算最后的得率，从而寻找最科学的粗多糖提取方法，以期为行业中粗多糖的提取方法提供一些参考。
关键词：灵芝 粗多糖提取 得率
中图分类号：S567.31 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）06-0000-00
研究灵芝中粗多糖的主要手段就是对提取的粗多糖的得率进行测定，这也是反映灵芝中粗多糖含量多少的一个重要指，下面就对灵芝中粗多糖四种提取方法的得率进行分析。
1灵芝粗多糖的提取方法
1.1沸水提取法
将1g灵芝超细粉末，加入50ml的离心管中，在其中加入25ml双蒸馏水，是灵芝超细粉末能够充分的浸泡，然后放置在沸水浴中2h，离心后收集上清，待其沉淀后，再加入25ml双蒸馏水，放置在沸水浴中1h，离心后收集上清，将两次得到的上清溶液混合，用双蒸馏水将其定容到50ml，从中取出1ml，加入5ml无水的乙醇，摇匀后放置在4℃的环境中12h，待其取出后以4000r/min的速度离心后收集沉淀，用少量的无水乙醇重新使沉淀悬浮，然后洗涤沉淀2次，最后自然风干，加入5ml双蒸馏水将沉淀溶解，就得到了等待检测的粗多糖溶液。
1.2行标法
将0.5g—1g灵芝超细粉末加入到50ml的离心管中，用5ml水浸泡，再缓慢加入20ml无水乙醇，摇匀，是其充分混合，然后放置在超声提取器中，待超声提取30min后，以4000r/min的速度离心10min，去掉上清。用10ml乙醇溶液将剩下的沉淀物洗涤、离心。用水将其转入到圆底烧瓶，加入50ml蒸馏水，装上冷凝管，放入沸水浴中提取2h，待冷却到室温后，过滤，将上清液再转移到100ml的容量瓶中，洗涤残渣2—3次，最后将洗涤液转移到容量瓶中，加水，定容。此溶液就是等待检测的粗多糖溶液。
1.3稀碱法1
还是称取1g灵芝超细粉末将其加入20ml离心管中，然后加入25ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液对灵芝粉末进行浸泡，然后放在50℃使得水浴中1h，离心后收集上清，将沉淀再用25ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液悬浮，放在50℃的水浴中1h，离心后收集上清，将两次得到的上清进行混合，用0.5mol/L的碳酸氢钠溶液定容到50ml。然后后面的操作跟沸水提取法就一样了。
1.4稀碱法2
操作方法基本与第三种类似，只是在最后，用无水乙醇沉淀的时候，向混合液中加入0.5mol/L的盐酸并将pH控制在6.0—6.5，之内，后面的方法就跟稀碱提取法一样了。
2对粗多糖的测定
2.1测定
测定粗多糖的主要方法就是运用硫酸——苯酚法进行显色反应来进行测定。将上面实验得到的粗多糖待测溶液取出0.5ml，然后在里面加入3.5ml的浓硫酸和0.75ml 5%的苯酚溶液，摇匀后用双蒸馏水定容到5ml，静止，待溶液冷却到室温后，再用双蒸馏水其进行调零，在
488nm下吸收光值，进而换算呈得率，计算的公式为：
得率=（C×V）÷M×100%
其中：C——提取溶液中出多糖的浓度；V——提取溶液的总体积；M——提取所用的领子的实体质量。
2.2影响
碱性盐溶液跟无水乙醇混合时会产生沉淀，而粗多糖也会与无水乙醇产生沉淀。为了使结果更加的准确，避免碱性盐溶液对显色反应造成干扰，可以用以下两种方法来检验：1：取1ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液，在其中加入5ml无水乙醇，离心后收集沉淀，再用5ml双蒸馏水将沉淀溶解，用硫酸——苯酚进行显色反应。2：直接用0.5ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液进行显色反应。通过以上两种方法的检测，记录的影响结果如下：
从上表可以看出，碳酸氢钠碱性溶液对硫酸——苯酚的显色反应确实存在影响，在吸收的光波长相同的情况下，这个影响在0.1个吸光值以内，由此可见，以0.5mol/L碳酸氢钠溶液提取的粗多糖的得率比实际情况会稍微偏大。
3分析结果
通过上述实验，我们可以得出灵芝中粗多糖得率测定结果，如下图：
从上图中可以很直观的看出，灵芝中粗多糖的提取方法中，采用稀碱提取法的得率最高，基本上接近2%了，而沸水提取法的得率最低，其余两种提取法中的得率基本相近，介于稀碱提取法和沸水提取法之间。
4稀碱法1可行性的验证
从上述可知，稀碱法1在四种方法中粗多糖的得率最高，那么在灵芝的其他品种中是不是也是一样呢？为了验证它的可行性，运用上述实验方法，对灵芝的不同品种又进行了实验，得出不同的得率，如下图：
其中GI—16、GI—20、GI—H、GI—YW、Gap—1均为灵芝的不同品种，从图形可以看出，GI—H的得率比较高，GI—20得率相对来说要少一点，说明运用稀碱法1对灵芝进行粗多糖的提取，还可以知道不同品种粗多糖含量的差异性，可以运用在灵芝不同品种中对粗多糖提取的研究。
5结语
通过实验得知，沸水法的粗多糖得率并不是很高但是简单；行标法能够获得比较完整的多糖类物质但是步骤复杂；稀碱法1的得率比较高，但其中很可能也含得有降解的多糖，所以每个方法都有其优点和缺点，所以在，实际情况中，还需要根据实际情况来选择合适的方法。
收稿日期：2015-03-18
作者简介：刘佳宁（1968—），女，江苏南京人，工程师，本科，目前在江苏省食品药品监督检验研究院从事检验工作。
关键词：灵芝 粗多糖提取 得率
中图分类号：S567.31 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）06-0000-00
研究灵芝中粗多糖的主要手段就是对提取的粗多糖的得率进行测定，这也是反映灵芝中粗多糖含量多少的一个重要指，下面就对灵芝中粗多糖四种提取方法的得率进行分析。
1灵芝粗多糖的提取方法
1.1沸水提取法
将1g灵芝超细粉末，加入50ml的离心管中，在其中加入25ml双蒸馏水，是灵芝超细粉末能够充分的浸泡，然后放置在沸水浴中2h，离心后收集上清，待其沉淀后，再加入25ml双蒸馏水，放置在沸水浴中1h，离心后收集上清，将两次得到的上清溶液混合，用双蒸馏水将其定容到50ml，从中取出1ml，加入5ml无水的乙醇，摇匀后放置在4℃的环境中12h，待其取出后以4000r/min的速度离心后收集沉淀，用少量的无水乙醇重新使沉淀悬浮，然后洗涤沉淀2次，最后自然风干，加入5ml双蒸馏水将沉淀溶解，就得到了等待检测的粗多糖溶液。
1.2行标法
将0.5g—1g灵芝超细粉末加入到50ml的离心管中，用5ml水浸泡，再缓慢加入20ml无水乙醇，摇匀，是其充分混合，然后放置在超声提取器中，待超声提取30min后，以4000r/min的速度离心10min，去掉上清。用10ml乙醇溶液将剩下的沉淀物洗涤、离心。用水将其转入到圆底烧瓶，加入50ml蒸馏水，装上冷凝管，放入沸水浴中提取2h，待冷却到室温后，过滤，将上清液再转移到100ml的容量瓶中，洗涤残渣2—3次，最后将洗涤液转移到容量瓶中，加水，定容。此溶液就是等待检测的粗多糖溶液。
1.3稀碱法1
还是称取1g灵芝超细粉末将其加入20ml离心管中，然后加入25ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液对灵芝粉末进行浸泡，然后放在50℃使得水浴中1h，离心后收集上清，将沉淀再用25ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液悬浮，放在50℃的水浴中1h，离心后收集上清，将两次得到的上清进行混合，用0.5mol/L的碳酸氢钠溶液定容到50ml。然后后面的操作跟沸水提取法就一样了。
1.4稀碱法2
操作方法基本与第三种类似，只是在最后，用无水乙醇沉淀的时候，向混合液中加入0.5mol/L的盐酸并将pH控制在6.0—6.5，之内，后面的方法就跟稀碱提取法一样了。
2对粗多糖的测定
2.1测定
测定粗多糖的主要方法就是运用硫酸——苯酚法进行显色反应来进行测定。将上面实验得到的粗多糖待测溶液取出0.5ml，然后在里面加入3.5ml的浓硫酸和0.75ml 5%的苯酚溶液，摇匀后用双蒸馏水定容到5ml，静止，待溶液冷却到室温后，再用双蒸馏水其进行调零，在
488nm下吸收光值，进而换算呈得率，计算的公式为：
得率=（C×V）÷M×100%
其中：C——提取溶液中出多糖的浓度；V——提取溶液的总体积；M——提取所用的领子的实体质量。
2.2影响
碱性盐溶液跟无水乙醇混合时会产生沉淀，而粗多糖也会与无水乙醇产生沉淀。为了使结果更加的准确，避免碱性盐溶液对显色反应造成干扰，可以用以下两种方法来检验：1：取1ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液，在其中加入5ml无水乙醇，离心后收集沉淀，再用5ml双蒸馏水将沉淀溶解，用硫酸——苯酚进行显色反应。2：直接用0.5ml 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液进行显色反应。通过以上两种方法的检测，记录的影响结果如下：
从上表可以看出，碳酸氢钠碱性溶液对硫酸——苯酚的显色反应确实存在影响，在吸收的光波长相同的情况下，这个影响在0.1个吸光值以内，由此可见，以0.5mol/L碳酸氢钠溶液提取的粗多糖的得率比实际情况会稍微偏大。
3分析结果
通过上述实验，我们可以得出灵芝中粗多糖得率测定结果，如下图：
从上图中可以很直观的看出，灵芝中粗多糖的提取方法中，采用稀碱提取法的得率最高，基本上接近2%了，而沸水提取法的得率最低，其余两种提取法中的得率基本相近，介于稀碱提取法和沸水提取法之间。
4稀碱法1可行性的验证
从上述可知，稀碱法1在四种方法中粗多糖的得率最高，那么在灵芝的其他品种中是不是也是一样呢？为了验证它的可行性，运用上述实验方法，对灵芝的不同品种又进行了实验，得出不同的得率，如下图：
其中GI—16、GI—20、GI—H、GI—YW、Gap—1均为灵芝的不同品种，从图形可以看出，GI—H的得率比较高，GI—20得率相对来说要少一点，说明运用稀碱法1对灵芝进行粗多糖的提取，还可以知道不同品种粗多糖含量的差异性，可以运用在灵芝不同品种中对粗多糖提取的研究。
5结语
通过实验得知，沸水法的粗多糖得率并不是很高但是简单；行标法能够获得比较完整的多糖类物质但是步骤复杂；稀碱法1的得率比较高，但其中很可能也含得有降解的多糖，所以每个方法都有其优点和缺点，所以在，实际情况中，还需要根据实际情况来选择合适的方法。
收稿日期：2015-03-18
作者简介：刘佳宁（1968—），女，江苏南京人，工程师，本科，目前在江苏省食品药品监督检验研究院从事检验工作。