【摘 要】
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目的建立以结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,pBEV表达质粒为载体,将guaB2基因克隆至pBEV以
【机 构】
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中国医学科学院医药生物技术研究所重点室
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目的建立以结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,pBEV表达质粒为载体,将guaB2基因克隆至pBEV以构建pBEV::guaB2重组表达质粒,表达并纯化重组的结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶;建立以测定反应体系340nm吸光值变化速率来评价该酶活性的检定方法;构建次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂的高通量筛选模型,对该模型的可靠性进行评价并应用该模型对1765个化合物进行筛选。结果成功构建了结核分枝杆菌guaB2基因的表达载体;最佳反应条件下重组结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶酶比活力为736U/mg;所建立的高通量筛选模型Z’因子为0.68,可用于次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂筛选;应用此模型对1765个化合物样品进行筛选,得到5个具有酶抑制活性的样品,阳性率为0.28%。结论建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型筛选得到的阳性药物具有进一步深入研究的意义。
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