【摘 要】
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本研究从人睾丸组织的总RNA中纯化mRNA,并以此为模板,在AMV反转录酶的作用下,制备互补的SS-cDNA。用RNaseH降解模板mRNA,经DNA多聚酶Ⅰ作用,合成ds-cDNA。用T_4DNA多聚酶制备
【机 构】
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本研究从人睾丸组织的总RNA中纯化mRNA,并以此为模板,在AMV反转录酶的作用下,制备互补的SS-cDNA。用RNaseH降解模板mRNA,经DNA多聚酶Ⅰ作用,合成ds-cDNA。用T_4DNA多聚酶制备cDNA的平末端,在T_4DNA连接酶的作用下,连接Ecorl接头并与λgt11载体重组连接,以大肠杆菌Y1090做受体菌转染,构建人睾丸cDNA文库。结果表明cDNA文库构建成功,将对生殖和避孕进一步研究发挥重要的作用。
In this study, mRNA was purified from human testis tissue total RNA and used as a template to make complementary SS-cDNA under the action of AMV reverse transcriptase. Degradation of template mRNA with RNaseH, the role of DNA polymerase Ⅰ, ds-cDNA synthesis. The T_4 DNA polymerase was used to prepare the blunt end of the cDNA. The Ecorl linker was ligated with T_4 DNA ligase and ligated with the λgt11 vector. The E. coli Y1090 was used as the transfectant to construct a human testis cDNA library. The results show that the successful construction of the cDNA library will play an important role in further research on reproduction and contraception.
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