【摘 要】
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目的 观察miR-193a-3p对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、迁移和细胞周期的影响,探讨miR-193a-3p靶向调控髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)的机制.方法 DLBCL患者80例,同期诊治反应性增生淋巴结患者46例,取活检淋巴结组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-193a-3p相对表达量,比较DLBCL患者与反应性增生淋巴结患者、不同临床病理特征DLBCL患者淋巴结组织mi
【机 构】
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延安大学附属医院肿瘤科,陕西延安716000;延安市人民医院肿瘤血液科,陕西延安716000
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目的 观察miR-193a-3p对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、迁移和细胞周期的影响,探讨miR-193a-3p靶向调控髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,MCL-1)的机制.方法 DLBCL患者80例,同期诊治反应性增生淋巴结患者46例,取活检淋巴结组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-193a-3p相对表达量,比较DLBCL患者与反应性增生淋巴结患者、不同临床病理特征DLBCL患者淋巴结组织miR-193a-3p相对表达量.取对数生长期人淋巴内皮细胞HLEC及DLBCL细胞系HBL1、OCI-LY8、OCFLY10、SU-DHL-4细胞,采用实时荧光定量PCR法检测miR-193a-3p相对表达量.选择低表达miR-193a-3p的HBL1细胞,随机分为对照组、转染组和MCL-1过表达组,对照组转染NC mimic,转染组转染miR-193a-3p mimic,MCL-1过表达组转染miR-193a-3p mimic及MCL-1过表达质粒.采用实时荧光定量PCR法检测转染48 h时对照组、转染组miR-193a-3p相对表达量及3组MCL-1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组转染48 h时MCL-1蛋白相对表达量,采用MTS法检测3组转染48 h后培养48 h时细胞增殖的吸光度(optical density,OD)值,采用流式细胞术检测3组转染48 h时细胞周期,采用Transwell小窒试验检测3组转染48 h后培养12h时细胞迁移.应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-193a-3p靶向调控MCL-1.结果 DLBCL患者淋巴结组织miR-193a-3p相对表达量(0.87±0.54)低于反应性增生淋巴结患者(1.58±0.66)(P＜0.05).DLBCL患者淋巴结组织miR-193a-3p相对表达量在Ki-67阳性率＞60％ (0.76±0.43)、有结外侵犯(0.79±0.44)、Ann Arbor分期Ⅲ～Ⅳ期(0.78±0.48)、国际预后指数评分3～5分(0.60±0.46)者分别低于Ki-67阳性率≤60％、无结外侵犯、Ann Arbor分期Ⅰ～Ⅱ期、国际预后指数评分0～2分者(0.94±0.36、1.01±0.30、0.99土0.42、1.04±0.53)(P＜0.05),不同年龄、性别DLBCL患者淋巴结组织miR-193a-3p相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).OCI-LY10、OCI-LY8、SU-DHL-1、HBL1细胞miR-193a-3p相对表达量(2.90±0.71、2.21±0.23、1.38±0.34、0.78±0.17)均低于HLEC细胞(6.13±0.29)(P＜0.05),HBL1细胞低于OCFLY10、OCI-LY8、SU-DHL-1细胞(P＜0.05).转染组miR-193a-3p相对表达量(1.01±0.06)高于对照组(0.47±0.08)(P＜0.05).转染组MCL-1 mRNA(0.54±0.04)及蛋白(0.23±0.03)相对表达量均低于MCL-1过表达组(0.72±0.06、0.40±0.05)和对照组(1.00±0.03、1.04±0.06)(P＜0.05),MCL-1过表达组低于对照组(P＜0.05).转染组细胞增殖OD值(0.65±0.09)低于MCL-1过表达组(0.78±0.10)和对照组(1.07±0.08) (P＜0.05),G2/M期细胞比率[(30.83±2.16)％]高于MCL-1过表达组[(27.43±2.64)％]和对照组[(22.82±2.53)％](P＜0.05),细胞穿膜数目[(18.33±7.35)个]少于MCL-1过表达组[(38.67±6.84)个]和对照组[(64.33±8.62)个](P＜0.05);MCL-1过表达组细胞增殖OD值低于对照组,G2/M期细胞比率高于对照组,细胞穿膜数目少于对照组(P＜0.05).TargetScan 7.2软件预测显示MCL-1的启动子区与miR-193a-3p具有结合位点,miR-193a-3p+ MCL-1-wt组荧光素酶活性(0.36±0.08)低于NC+ MCL-1-wt组(1.00±0.03)(P＜0.05),miR-193a-3p+ MCL-1-mut组荧光素酶活性(0.94±0.16)与NC+MCL-1-mut组(1.00±0.05)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-193a-3p表达降低与DLBCL恶性进展相关,miR-193a-3p负调控MCL-1抑制DLBCL细胞增殖、迁移,使细胞周期阻滞在G2/M期.
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