【摘 要】
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目的克隆人牙本质涎磷蛋白(DSPP)成熟肽编码区基因片段并进行原核表达. 方法用异硫氰酸胍一步法从人牙乳头组织中抽提总RNA,用Oligo(dt)作引物逆转录合成牙乳头cDNA, 然后利
【机 构】
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第四军医大学口腔医学院牙体科,陕西,西安,710033中国科学院上海细胞生物学研究所基因工程组,上海,200031;
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目的克隆人牙本质涎磷蛋白(DSPP)成熟肽编码区基因片段并进行原核表达. 方法用异硫氰酸胍一步法从人牙乳头组织中抽提总RNA,用Oligo(dt)作引物逆转录合成牙乳头cDNA, 然后利用PCR法,从cDNA中扩增出人DSPP成熟肽基因片段(约600 bp), 将所得基因片段插入pBluescript质粒载体,转化到大肠杆菌XL1-Blue后挑选阳性克隆,提取重组质粒DNA, 通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆;将DSPP基因重组入表达载体pGEX-3X中构建表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达. 结果酶切图谱和序列分析与国外文献报道一致,DSPP蛋白在大肠杆菌中得到表达. 结论克隆到人DSPP成熟肽编码区基因片段,并在原核中得到表达,为进一步研究其功能奠定基础.
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