【摘 要】
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目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰在软骨细胞的可行性,确定是否可以通过抑制软骨细胞中Aggrecanase-1的表达实现对软骨中Aggrecan的保护作用.方法 将设计并构建的shRNAAggrecana
【机 构】
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山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科266003,青岛大学附属医院关节外科;
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目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰在软骨细胞的可行性,确定是否可以通过抑制软骨细胞中Aggrecanase-1的表达实现对软骨中Aggrecan的保护作用.方法 将设计并构建的shRNAAggrecanase-1慢病毒表达载体转染进RA患者关节软骨细胞.通过荧光定量PCR检测转染后不同时间点不同转染复数下Aggrecanase-1及Aggrecan mRNA水平的变化;通过免疫细胞化学方法测定各组Aggrecan蛋白水平表达量的变化,所有数据利用SPSS 19.0软件,采用配对t检验及方差分析进行统计分析.结果 由慢病毒介导的RNA干扰中,随着Aggrecanase-1 mRNA表达水平显著下降,Aggrecan mRNA 和蛋白表达也相应地增加,特别是shRNA4组变化较为显著,其中Aggrecanase-1 mRNA由开始的1.083±0.133降为0.074±0.004(t=35.71,P＜0.05);Aggrecan mRNA由开始的1.182±0.160增加到2.922±0.169 (t=19.43,P＜0.01);同时Aggrecan蛋白多糖由开始的507±265增加到2 270±334(t=11.43,P＜0.05).结论 由慢病毒介导的RNA干扰可以实现对Aggrecanase-1表达的抑制,且对软骨细胞的表型和生长速度没有负面影响;慢病毒介导的RNA干扰可以通过抑制Aggrecanase-1的表达实现对Aggrecan的保护,是一种缓解软骨退化的有效途径.
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