【摘 要】
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目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤于细胞生长和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤干细胞；依据靶基因序列设计siRNA，建立可克隆入pSilencer^TM 3.1-H1 neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统，鉴定正确后扩增质粒；利用脂质体转染法（Lipofectamin^TM 2000）转染脑胶质瘤于细胞，分别采用逆转录．聚合酶链反应（R
【机 构】
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徐州医学院附属医院神经外科,江苏221002,徐州医学院神经外科,徐州医学院附属医院神经外科,江苏221002,徐州医学院神经外科,徐州医学院神经外科
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目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤于细胞生长和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤干细胞；依据靶基因序列设计siRNA，建立可克隆入pSilencer^TM 3.1-H1 neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统，鉴定正确后扩增质粒；利用脂质体转染法（Lipofectamin^TM 2000）转染脑胶质瘤于细胞，分别采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot在mRNA和蛋白水平检测目的基因的表达，并分别采用噻唑蓝（MTT）法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤于细胞的生长抑制率及凋亡率。结果成功构建Survivin、FoxM1BshRNA表达质粒；RT—PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77．41±10．99、78.10±8．84及72．45±9.59、70.50±9．43、67．94±13．57；Westernblot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72、45±9．59、70．50±9．43、67．94±13．57及76．55±18．01、73．57±15．41、72．05±11．46。而细胞生长抑制率和凋亡率增加，双干扰组较单干扰组较为明显。结论成功构建Survivin，FoxM1BshRNA表达质粒。shRNA转染脑胶质瘤于细胞后，目的基因表达明显下降，从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖，促进凋亡。而双干扰效果更为显著。
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