CYP2C19基因多态性真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

• 作 者: 陈旺 俞竞 屈强 张伟 李智 吴兰香 温纯洁 周宏灏
• 机 构: 重庆医科大学生命科学研究院,中南大学临床药理研究所
• 出 处: 中国临床药理学与治疗学
• 发表日期: 2012年3期
• 关键词: CYP2C19 基因多态性 真核表达 转染 CYP2C19 Gene polymorphism Eukaryotic expression vector T
• 基金项目: 重庆市教育委员会科学技术研究项目（KJ090306）,重庆市自然科学基金（cstc2011jjAl0004）,国家自然科学基金（84402511）

构建细胞色素P450CYP2C19＊1、＊2、＊3真核表达载体，并分别转染人肝癌细胞（HepG2），建立高表达目的基因的稳定转染细胞系。方法：应用化学合成法合成CYP2C19＊1（野生型）序列，再以此为模板，体外定点突变PCR法构建＊2、＊3（突变型）。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3．1（-），经菌落PCR、酶切以及测序鉴定后，脂质体转染法转染Hep02细胞，通过0418选择培养，建立稳定转染细胞系，RT-PCR、WesternBlot分别检测CYP2C19＊1、＊2、＊3mRNA以