【摘 要】
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为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物。
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 东北林业大学野生动物资源学院; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 黑龙江省农产品质量检验检测中心;
【基金项目】
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横向课题[犬瘟热、细小病毒病、腺病毒病(Ⅰ型)三联活疫苗]
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为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(507 bp)、CPV(287 bp)、CAV-Ⅰ(590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性;CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9TCID50、101.7TCID50、101.7TCID50和102.2TCID50。利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33%(7/30)、CPV阳性率为20%(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33%(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断。
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