重组轮状病毒疫苗VP8~*蛋白与组织血型抗原的结合性研究

• 作 者: 邓中华 郭妮君 熊艺灿 谭超超 乐杨桦 陈杰 曹
• 机 构: 湖南省人民医院/湖南师范大学附属第一医院检验科; 湖南省妇幼保健院检验科; 湖南省人民医院胃肠小儿外科
• 出 处: 中国病原生物学杂志
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 轮状病毒 组织血型抗原 VP8~*蛋白
• 基金项目: 湖南省自然科学基金项目(No.2017JJ2151)

目的评价轮状病毒（Rotaviruses,RVs）疫苗株Rotarix和RotaTeq VP8^*蛋白与组织血型抗原（histo-blood group antigens,HBGAs）基因融合的免疫效果。方法从GenBank获取Rotarix和RotaTeq两种疫苗VP8^*蛋白基因序列,根据大肠埃希菌常用密码子进行序列优化后人工合成Rotarix和RotaTeqVP8^*蛋白基因并采用PCR扩增合成的两种基因,引物上、下游分别引入Nde I和Xho I限制性内切酶酶切位点。将PCR产物及载体pET-30a用Nde I和Xho I双酶切,经1.5%琼脂糖凝胶电泳回收目的片段后在T4连接酶作用下连接,连接产物转化至DH5α感受态细胞并进行PCR鉴定,取阳性菌液提取质粒,经Nde I和Xho I双酶切鉴定正确后测序。将合成的基因序列与表达载体pET-30a连接后导入大肠埃希菌BL21（DE3）,加入IPTG诱导表达,经Ni²⁺ beads亲和层析纯化得到VP8^*-His融合蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析。利用寡糖结合试验检测目的蛋白与lea、lex、leb、ley、A、B、H1、H2 8种寡糖的结合特性,利用唾液结合试验检测VP8^*蛋白与不同血型组织抗原表型唾液的结合特征。结果成功构建重组质粒,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为26×10³,与预期的分子质量相符合。寡糖结合试验显示Rotarix和RotaTeq VP8^*蛋白能与H1型HBGAs结合,唾液结合试验显示二者能与分泌型唾液结合而不与非分泌型唾液结合。结论成功克隆表达了轮状病毒疫苗株Rotarix和RotaTeq VP8^*蛋白,两种蛋白均有与H1型HBGAs结合的特性。