【摘 要】
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目的:探究siRNA沉默ANGPTL4对MRC-5Ⅰ型胶原表达的影响.方法:建立体外硅肺模型;构建ANGPTL4干扰质粒,ANGPTL4阴性和干扰质粒(上海吉玛公司),并将其转染入MRC-5中,选择Western
【机 构】
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华北理工大学基础医学院,河北 唐山 063210
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目的:探究siRNA沉默ANGPTL4对MRC-5Ⅰ型胶原表达的影响.方法:建立体外硅肺模型;构建ANGPTL4干扰质粒,ANGPTL4阴性和干扰质粒(上海吉玛公司),并将其转染入MRC-5中,选择Western blot和RT-PCR法,在48h后把最佳干扰质粒筛选出来,ANGPTL4最佳干扰质粒转染MRC-5,并加强对MRC-5中I型胶原蛋白含量和表达,应用ELISA法展开相应的检测.结果:对四种质粒转染后蛋白、ANGPTL4表达,经RT-PCR、Western-blot法实现相应的检测,mRNA和蛋白,以及ANGPTL4相对表达量,干扰质粒转染MRC-5细胞后,相较于空白组存在显著性的降低;相较于阴性质粒转染组和对照组,四组质粒转染组蛋白相对表达量有统计学意义,其中质粒A的效果最明显,降低ANGPTL4的蛋白效果最好.最佳干扰质粒转染MRC-5后,同一组12h、24h、36h、48h、60h时,ELISA结果显示MRC-5I型胶原表达及含量,36h小时达到峰值.质粒干扰组与对照组相比,降低了MRC-5I型胶原含量和表达情况.结论:通过应用RNA干扰技术,把ANGPTL4-SiRNA转染入MRC-5细胞中,能够实现对ANGPTL4基因表达的有效抑制;经AM上清刺激MRC-5细胞I型胶原蛋白表达量,在沉默硅肺相关上调基因ANGPTL4后发生减少.
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