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【摘要】 目的 探讨尿液视黄醇结合蛋白（UrRBP）了解肾脏病患者肾小管功能是否有损害以及其在肾脏病诊断中的价值。 方法 应用ELISA法对正常对照组和不同肾脏病组进行UrRBP测定。 结果 肾脏病组与正常对照组之间差异显著，P<0.01，各肾脏病组之间比较差异有统计学意义，P<0.01。 结论 通过对UrRBP的测定，发现其结果与肾小管损害程度间存在一定的联系，也说明在临床早期进行UrRBP检测的必要性。
【关键词】 视黄醇结合蛋白；酶联免疫吸附试验；肾脏疾病
视黄醇结合蛋白（Retinol binding protein，RBP）为血浆中一种分子量蛋白质，分子质量为21200，由于其分子量较小，可经肾小球自由滤过，并由肾近端小管重吸收。当肾近端小管受损害时，尿液视黄醇结合蛋白浓度（UrRBP）会明显增高，我们应用ELISA法对UrRBP进行检测，判断其在肾脏病中肾小管功能是否有损害程度以及其在肾脏病诊断中的价值。
1 资料与方法
1.1 对象选择 正常对照组，健康成年40例，男性25例，女性15例，平均年龄27.9岁。通过该组UrRBP的检测来建立UrRBP的正常值，同时也与肾脏病组进行比较对照。肾脏病患者选自我院肾脏科住院患者，依其临床诊断分为急性肾功能衰竭（ARF）组35例，男性20例，女性15例，平均年龄43.1岁；慢性肾功能衰竭（CRF）组40例，男性25例，女性15例，平均年龄42.5岁；慢性肾小球肾炎（CGN）组40例，男性21例，女性19例，平均年龄37.3岁IgA肾病（IgAN）组40例，男性28例，女性12例，平均年龄28.6岁；肾病综合征（NS）组40例，男性25例，女性15例，平均年龄33.2岁；狼疮性肾炎（LN）组40例，男性8例，女性32例，平均年龄32.0岁；过敏性紫癜（HSP）组24例，男性14例，女性10例，平均年龄27.0岁；糖尿病肾病（DN）组24例，男性15例，女性9例，平均年龄55.2岁。所有尿标本均为留取的随机尿标本。（尿液标本也可先冷藏于-70°检测时取出不受影响[1]。
1.2 ELISA检测步骤 UrRBP的ELI SA检测试剂盒购自北京北方生物技术有限公司。检测前应将尿液标本混匀并短暂高速离心，取其上清进行检测，按照试剂盒说明和在预实验的基础上，将待检尿标本分别按1：50，1：500，1：000，1：2000进行稀释，试剂盒内的标准品按照说明进行稀释。将稀释好的标准品和待检样本加入酶标微孔内，37°温育最适时间为90-120min，酶标单抗温育时间为60min，OPD显色时应随时观察并适时终止反应，于酶标仪（RAT600型）490nm测吸光度，比较波长为630nm，根据标准品曲线所得公式计算各待测样本稀释所对应的RBP浓度。
1.3 正常值建立 对40名健康成人的检测结果进行分析，在预实验的基础上选择对其在1：50稀释度的结果用几何均数法求其平均值及标准差，按95%单侧可信度求得UrRBP的正常值上限浓度为0.5mg/L，拟定大于此值者为异常，即可反映肾近端小管的功能受损。
1.4 统计学处理 各组间的比较行配伍间X2检验。
2 结 果
不同肾脏疾病组的UrRBP测定结果与正常组比较见表1。
各肾脏病组与正常对照组比较，差异非常显著（P<0.01）；在各型肾脏病组间以IgAN组的UrRBP的异常例数所占该组总例数的百分数小（25%），与其它肾脏病组相比较差异有统计学意义（P<0.01）；而ARF，CRF组UrRBP异常例数所占本组总例数的百分数最高，分别为82.86%和87.75%。与其它各组相比较差异有统计学意义（P<0.01）。
3 讨 论
本研究由于所选患者，在诊断上相互间可能存在一定程度的交叉。所以，UrRBP异常较难判断对某一肾脏病的意义。但本结果至少可以说明在肾脏病中开展UrRBP临床检测是必要的。各肾病组与正常对照组比较，发现UrRBP结果和肾小管的损害程度间存在着一定的联系，同时也说明早期进行UrRBP检测的必要性，在亚临床期就有可能发现一些潜在的病变。视黄醇结合蛋白是由肝脏合成的低分子量蛋白质，并主要在肾脏中进行代谢；在血浆中主要以结合形式存在，与前白蛋白和维生素A结合成三体复合物，参与维生素A的转运，也有一部分与一种名为transthyretin的转运T4的蛋白质结合，同时也有一部分游离形式的RBP存在[2]，正常生理状况下血浆里游离形式的RBP可自由滤过肾小球，约99.97%被肾近端小管重吸收。当肾小管继发于肾小球病变后而受累或由于化学试剂、氨基甙类抗生素、化工重金属等直接损害肾小管的因素作用下，肾小管功能发生改变，导致其重吸收功能降低，以致UrRBP的浓度水平出现异常[3-4]。我们认为有必要进一步深入探索UrRBP在肾病诊疗及預后中的价值。
参考文献
[1] Mao J.Frozen storage of urine sample before ELISA measurement of retinol binding protein [J]ClinChem，1996，42（3）：466-467.
[2] Goodman D S.Plasma retinol binding protein [J].Ann N Y Acad Sci，1980，348：378-390.
[3] Lybarger J A，Lichtveld M Y，Amler R W.Biomedical of the kidney for persons exposed to hazardous substances the environment [J].Een，Fail，1999，21（3）：263-274.
[4] Lapsley M.Sensitive assays for urinary Retinol binding protein and beta2 glycoprotein 1 based on commercially available standards [J].Ann Chin Biochem，1998，35（pt 1）：115-119.
【关键词】 视黄醇结合蛋白；酶联免疫吸附试验；肾脏疾病
视黄醇结合蛋白（Retinol binding protein，RBP）为血浆中一种分子量蛋白质，分子质量为21200，由于其分子量较小，可经肾小球自由滤过，并由肾近端小管重吸收。当肾近端小管受损害时，尿液视黄醇结合蛋白浓度（UrRBP）会明显增高，我们应用ELISA法对UrRBP进行检测，判断其在肾脏病中肾小管功能是否有损害程度以及其在肾脏病诊断中的价值。
1 资料与方法
1.1 对象选择 正常对照组，健康成年40例，男性25例，女性15例，平均年龄27.9岁。通过该组UrRBP的检测来建立UrRBP的正常值，同时也与肾脏病组进行比较对照。肾脏病患者选自我院肾脏科住院患者，依其临床诊断分为急性肾功能衰竭（ARF）组35例，男性20例，女性15例，平均年龄43.1岁；慢性肾功能衰竭（CRF）组40例，男性25例，女性15例，平均年龄42.5岁；慢性肾小球肾炎（CGN）组40例，男性21例，女性19例，平均年龄37.3岁IgA肾病（IgAN）组40例，男性28例，女性12例，平均年龄28.6岁；肾病综合征（NS）组40例，男性25例，女性15例，平均年龄33.2岁；狼疮性肾炎（LN）组40例，男性8例，女性32例，平均年龄32.0岁；过敏性紫癜（HSP）组24例，男性14例，女性10例，平均年龄27.0岁；糖尿病肾病（DN）组24例，男性15例，女性9例，平均年龄55.2岁。所有尿标本均为留取的随机尿标本。（尿液标本也可先冷藏于-70°检测时取出不受影响[1]。
1.2 ELISA检测步骤 UrRBP的ELI SA检测试剂盒购自北京北方生物技术有限公司。检测前应将尿液标本混匀并短暂高速离心，取其上清进行检测，按照试剂盒说明和在预实验的基础上，将待检尿标本分别按1：50，1：500，1：000，1：2000进行稀释，试剂盒内的标准品按照说明进行稀释。将稀释好的标准品和待检样本加入酶标微孔内，37°温育最适时间为90-120min，酶标单抗温育时间为60min，OPD显色时应随时观察并适时终止反应，于酶标仪（RAT600型）490nm测吸光度，比较波长为630nm，根据标准品曲线所得公式计算各待测样本稀释所对应的RBP浓度。
1.3 正常值建立 对40名健康成人的检测结果进行分析，在预实验的基础上选择对其在1：50稀释度的结果用几何均数法求其平均值及标准差，按95%单侧可信度求得UrRBP的正常值上限浓度为0.5mg/L，拟定大于此值者为异常，即可反映肾近端小管的功能受损。
1.4 统计学处理 各组间的比较行配伍间X2检验。
2 结 果
不同肾脏疾病组的UrRBP测定结果与正常组比较见表1。
各肾脏病组与正常对照组比较，差异非常显著（P<0.01）；在各型肾脏病组间以IgAN组的UrRBP的异常例数所占该组总例数的百分数小（25%），与其它肾脏病组相比较差异有统计学意义（P<0.01）；而ARF，CRF组UrRBP异常例数所占本组总例数的百分数最高，分别为82.86%和87.75%。与其它各组相比较差异有统计学意义（P<0.01）。
3 讨 论
本研究由于所选患者，在诊断上相互间可能存在一定程度的交叉。所以，UrRBP异常较难判断对某一肾脏病的意义。但本结果至少可以说明在肾脏病中开展UrRBP临床检测是必要的。各肾病组与正常对照组比较，发现UrRBP结果和肾小管的损害程度间存在着一定的联系，同时也说明早期进行UrRBP检测的必要性，在亚临床期就有可能发现一些潜在的病变。视黄醇结合蛋白是由肝脏合成的低分子量蛋白质，并主要在肾脏中进行代谢；在血浆中主要以结合形式存在，与前白蛋白和维生素A结合成三体复合物，参与维生素A的转运，也有一部分与一种名为transthyretin的转运T4的蛋白质结合，同时也有一部分游离形式的RBP存在[2]，正常生理状况下血浆里游离形式的RBP可自由滤过肾小球，约99.97%被肾近端小管重吸收。当肾小管继发于肾小球病变后而受累或由于化学试剂、氨基甙类抗生素、化工重金属等直接损害肾小管的因素作用下，肾小管功能发生改变，导致其重吸收功能降低，以致UrRBP的浓度水平出现异常[3-4]。我们认为有必要进一步深入探索UrRBP在肾病诊疗及預后中的价值。
参考文献
[1] Mao J.Frozen storage of urine sample before ELISA measurement of retinol binding protein [J]ClinChem，1996，42（3）：466-467.
[2] Goodman D S.Plasma retinol binding protein [J].Ann N Y Acad Sci，1980，348：378-390.
[3] Lybarger J A，Lichtveld M Y，Amler R W.Biomedical of the kidney for persons exposed to hazardous substances the environment [J].Een，Fail，1999，21（3）：263-274.
[4] Lapsley M.Sensitive assays for urinary Retinol binding protein and beta2 glycoprotein 1 based on commercially available standards [J].Ann Chin Biochem，1998，35（pt 1）：115-119.