西藏环状病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

• 作 者: 冯盼盼 殷启凯 赵洁荣 付士红 李樊 何英 许松涛 梁国栋 聂凯 王环宇
• 机 构: 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病
• 出 处: 中华实验和临床病毒学杂志
• 发表日期: 2021年35期
• 关键词: 西藏环状病毒 实时荧光定量RT-PCR 分子检测

目的

建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。

方法

收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列，利用Clustal X 2.1软件进行比对，根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针；以体外转录的RNA为标准品，建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法，绘制荧光定量标准曲线；对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。

结果

引物与探针具有良好的特异性，对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×10²拷贝/反应，在1.0×10^2～8拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线，同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查，结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。

结论

该方法灵敏度高、特异性强，可用于TIBOV的常规监测。