半滑舌鳎HIF-1α基因的原核表达与多克隆抗体的制备

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根据半滑舌鳎HIF-1αcDNA序列设计特异性引物,从半滑舌鳎肝脏中扩增HIF-1α用于表达片段,连接至载体pMD18-T,分别以KpnI和XholI对含有目的基因的质粒和pET-30a进行酶切,连接并转化大肠杆菌BL21中,构建了半滑舌鳎HIF-1α原核蛋白表达载体。以IPTG进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,免疫接种日本大耳白兔,制备了兔抗HIF-1α多克隆抗体。Western blot检测显示该多克隆抗体具有较好的特异性,能够与HIF-1α表达宿主菌蛋白特异性结合。
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