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【目的】建立体外培养及鉴定大鼠胫骨生长板软骨细胞的方法。【方法】采用胰酶和Ⅱ型胶原酶序贯消化法对5～8只3周龄SD大鼠胫骨生长板软骨行体外分离、培养并传至第6代、观察各代软骨细胞形态．MTT法绘制细胞生长曲线，Ⅱ型胶原免疫组化染色，阿力新蓝染色检测各代软骨细胞外基质硫酸糖氨多糖（GAG）含量和结构，采用逆转录聚合酶链反应检测各代细胞Ⅱ型胶原和aggreacan mRNA表达水平。【结果】体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加，细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形；MTT比色法显示，4代以前的软骨细胞的生长曲