当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞增殖和PI3K/AKT信号转导通路的影响

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目的:从PI3K/AKT信号转导通路探讨当归多糖、黄芪多糖及其配伍对化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞的调控机制。方法:C57BL/6小鼠20只,雌雄各半,28~32 g。给模型组小鼠每日腹腔注射1次环磷酰胺380 mg·kg-1,正常小鼠腹腔注射等量生理盐水,连续3 d。造模后,以脱颈椎法处死各组小鼠,取出股骨,剔除肌肉和结缔组织,剪开股骨两端,用6号针头以生理盐水反复冲洗骨髓腔,并将冲出的骨髓打碎,再用4号针头过滤制成单个细胞悬液,在离心机上2000 r/min,离心10 min,去上清液,加入4 mL冷70%乙醇固定,上振荡器摇匀制成骨髓干细胞样本。细胞实验分为6组,包括正常组、模型组、EPO组、EPO+(G-CSF)组、当归多糖组、黄芪多糖组、两药配伍组。直接给药当归多糖0.2 mg/mL,黄芪多糖0.2 mg/mL,EPO 50 U/mL,(G-CSF)50 U/mL于骨髓干细胞体外培养体系中,培养3 d,室内18~20℃,20%相对湿度,5%CO2,37℃孵育箱。采用MTT法检测骨髓干细胞生长和增殖的情况;采用ELISA检测骨髓干细胞中pPI3K和p-AKT的蛋白含量;采用RT-qPCR法检测骨髓干细胞中PI3K、AKT、PTEN的mRNA表达。结果:(1)对小鼠骨髓干细胞生长和增殖的影响。①造模后24 h,各给药组与模型组比较均有明显差异。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用不如单用当归多糖。②造模后48 h,各给药组与模型组比较均有明显差异,药物组之间差异均没有统计学意义。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。③造模后72 h,各给药组与模型组比较均有明显差异。当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(2)对PI3K、AKT的mRNA表达的影响。各给药组与模型组PI3K、Akt的mRNA比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖均有提升PI3K、Akt的mRNA作用,两药交互作用无统计学意义。(3)对pPI3K、p-AKT蛋白含量的影响。各给药组与模型组pPI3K、p-ATK的蛋白含量比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖有交互作用,合用比单一用药好。(4)对PTEN mRNA表达的影响。各给药组与模型组PTEN mRNA比较均有明显差异,当归多糖与黄芪多糖交互作用明显,合用比单一用药好。结论:(1)当归多糖、黄芪多糖及其配伍能够促进化疗性骨髓抑制小鼠骨髓干细胞增殖,两药配伍的作用优于单一用药。(2)当归多糖、黄芪多糖及两药配伍能够上调PI3K、AKT mRNA的表达,增加pPI3K和p-AKT的蛋白含量,下调PTEN mRNA的表达,两药配伍的作用优于单一用药。(3)当归多糖、黄芪多糖及两药配伍激活了PI3K/AKT信号转导通路,两药治疗化疗性骨髓抑制的作用可能与PI3K/AKT通路有关。
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