抗Her-2-scFv-SEC2融合免疫毒素的构建和功能研究(英文)

• 作 者: 徐明恺 张成刚 张惠文 周亚凤 张先恩 刘丽
• 机 构: 中国科学院沈阳应用生态研究所,中国科学院沈阳应用生态研究所,中国科学院沈阳应用生态研究所,中国科学院武汉病毒研究所,中国科学院武汉病毒研究所,中国科学院沈阳应用生态研究所 沈阳 110016,沈阳 1
• 出 处: 生物化学与生物物理进展
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 免疫毒素 scFv 表达载体 层析纯化 单链抗体 镍离子 包涵体 基因工程方法 生长抑制作用 融合免疫毒素

用基因工程方法,将金黄色葡萄球菌肠毒素 C2 与抗人表皮生长因子受体 HER-2 单链抗体 scFv-B1,以一连接短肽连接,构建融合免疫毒素 B-L-SEC2,并用改进的新型表达载体 pASK75-EX,在大肠杆菌 BL21(ED3)中表达. 以不溶性包涵体形式表达的目的蛋白经变性后以镍离子螯和层析纯化,并以透析法进行复性. 流式细胞术和 MTT 实验结果表明,纯化复性的融合免疫毒素 B-L-SEC2,在体外具有与 HER-2 过表达的靶细胞 SK-Br-3 特异性结合的活性,并对该细胞产生显著的特异性生长抑制作用.

Staphylococcal enterotoxin C2 and anti-human epidermal growth factor receptor (HER-2) scFv-B1 were ligated with a linker peptide to construct a fusion immunotoxin BL-SEC2 by genetic engineering method. The expression vector pASK75-EX was expressed in E. coli BL21 (ED3) .The protein of interest expressed in insoluble inclusion bodies was denatured and purified by nickel ion chelation chromatography and renaturation was performed by dialysis method. Flow cytometry and The results of MTT assay showed that the purified and refolded fusion immunotoxin BL-SEC2 had the activity of specifically binding to SK-Br-3, a target cell of HER-2 overexpression in vitro, and produced significant specific growth inhibition effect.