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目的 克服小分子蛋白或多肽在大肠杆菌表达系统中易降解、表达量低的问题,为基因工程生产此类产品提供一种简便有效的解决方案. 方法以33个氨基酸的小分子蛋白(factor C的S3功能区)为例,用PCR方法扩增了基因,并克隆到载体pBBS.利用载体带有的BbsⅠ酶切位点特性和添加到引物上的特殊序列,使插入片段在体外定向连接成多联体,然后重新连接到pBBS. 结果成功构建了S3的二联体、四联体及八联体克隆.转移至表达载体pET22b后,在BL21细菌宿主中诱导表达.S3单体表达不明显,而四联体(rS3-4mer)表达量最高.rS3-4mer经纯化后在酸性溶液中水解为rS3单体.以Western blot证明,多联体及其分解单体均可与S3抗血清特异性结合. 结论应用这一系统能有效地构建串联基因,从而提高小分子蛋白或多肽在大肠杆菌中的表达量。