丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1的反式调节基因筛选

• 作 者: 张连峰 李继昌 韩莉 成军 陈立东
• 机 构: 郑州大学第一附属医院消化内科北京地坛医院传染病研究所郑州大学第一附属医院消化内科郑州
• 出 处: 郑州大学学报：医学版
• 发表日期: 2007年4期
• 关键词: 抑制性消减杂交 丙型肝炎病毒 NS5ATP1基因 反式调节 suppression subtractive hybridization HCV NS5ATP
• 基金项目: 国家自然科学基金资助项目C03011402,C30070689,, 军队“九五”科技攻关基金资助项目98D063,, 军队回国留学人员启动基金资助项目98H038,, 军队“十五”科技攻关青年基金资助项目01Q138,, 军队“十五”科技攻关基金资助项目01MB135

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP1反式激活的相关基因,从分子生物学的角度研究HCV致病机制。方法:以NS5ATP1表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照组,从中分别提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与pGE