姜黄素上调线粒体融合蛋白2抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的实验研究

• 作 者: 连洁 洪广亮 仝欢 陈隆望 赵光举 应岚 支绍册 李萌芳 卢中秋
• 机 构: 32500 浙江省温州，温州医科大学附属第一医院急诊医学中心,32500 浙江省温州，温州医科大学附属第一医院急诊医学中心,32500 浙江省温州，温州医科大学附属第一医院急诊医学中心,32500 浙
• 出 处: 中华急诊医学杂志
• 发表日期: 2016年25期
• 关键词: Curcumin Sepsis Mice Lymphocyte Apoptosis Mitochondria Mitofusion2 Mitochondria

目的

研究姜黄素抑制脓毒症小鼠淋巴细胞凋亡的作用与机制。

方法

取45只清洁级BALB/c雄性小鼠，随机(随机数字法)分为3组，即假手术组(n＝15)，脓毒症组(n＝15)，姜黄素组(n＝15)，实验重复3次。脓毒症组行盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture，CLP)，术前予等体积生理盐水灌胃1周；姜黄素组行CLP术，术前给予姜黄素200 mg/(kg·d)灌胃1周；假手术组仅行开腹，不予以结扎、穿孔，术前等体积生理盐水灌胃1周。观察各组小鼠术后24 h病死率，并处死存活小鼠，分离脾脏淋巴细胞。采用流式细胞术、TUNEL法检测淋巴细胞凋亡情况；流式细胞术检测线粒体膜电位水平；Western Blot检测线粒体融合蛋白2(Mitofusin2，Mfn2)、Bax、Bcl-2蛋白表达。数据采用SPSS 18.0软件进行分析，计数资料采用χ²检验，计量资料组间比较采用单因素方差分析。

结果

小鼠病死率采用χ²检验，脓毒症组小鼠术后24 h病死率为46.7%，较假手术组0.00%明显升高(χ²＝27.391，P<0.01)，姜黄素组病死率较脓毒症组有所降低(40.0%vs. 46.7%，χ²＝6.429，P＝0.01)。脾淋巴细胞凋亡率比较采用单因素方差分析，3组比较，P<0.01，差异具有统计学意义。进一步两两比较，脓毒症组脾淋巴细胞凋亡率为(17.1±1.67)%，较假手术组(9.43±1.06)%明显增高(P<0.001)；姜黄素组淋巴细胞凋亡率(12.70±1.25)%较脓毒症组比较明显下降(P＝0.012)。脾淋巴细胞线粒体膜电位比较采用单因素方差分析，3组比较P<0.01，差异具有统计学意义。进一步两两比较，脓毒症组线粒体膜电位降低率为(45.13±4.14)%，较假手术组(21.63±1.62)%明显升高(P<0.01)，姜黄素组线粒体膜电位降低率为(29.67±2.15)%，较脓毒症组明显降低(P＝0.001)。蛋白表达情况采用单因素方差分析，3组线粒体Bax蛋白(P<0.01)、胞浆Bax蛋白(P<0.01) ，差异具有统计学意义。进一步两两比较，与假手术组比较，脓毒症组线粒体Bax蛋白表达水平明显上调(P＝0.001)，而胞浆Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。经姜黄素预处理后线粒体Bax蛋白水平较脓毒症组明显降低(P＝0.02)，胞浆Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。3组细胞总Mfn2蛋白(P<0.001)、Bcl-2蛋白(P＝0.001)，差异具有统计学意义。进一步两两比较，与假手术组比较，脓毒症组Mfn2蛋白(P＝0.015)、Bcl-2蛋白(P＝0.01)表达水平明显降低，经姜黄素预处理后Mfn2蛋白(P＝0.002)、Bcl-2蛋白(P＝0.001)水平明显上调。

结论

姜黄素能够上调Mfn2表达，促进线粒体融合进而抑制脓毒症小鼠脾淋巴细胞的凋亡。